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目的:观察婴幼儿血管瘤中内皮细胞和周细胞的形态、分布和抗原标记表达,初步探讨婴幼儿血管瘤内皮细胞和周细胞相互作用的机制。
方法:共获得9例婴幼儿血管瘤标本,其中增殖期5例,消退期2例,消退完成期2例;正常皮肤3例。标本分为两部分,分别用10%甲醛和2.5%戊二醛固定。HE染色观察在婴幼儿血管瘤病理演变过程中内皮细胞和周细胞的形态和分布的变化。透射电镜观察增殖期血管瘤微血管的超微结构。TUNEL染色观察血管瘤演变过程中内皮细胞和周细胞的凋亡状态。普通免疫组织化学染色观察内皮细胞抗原标记(CD31)、周细胞抗原标记(α-SMA)以及内皮细胞募集周细胞的相关配体和受体(PDGF-B和PDGFR-β)在血管瘤组织中的表达。荧光免疫组织化学双染色(CD31与α-SMA、CD31与PDGF-B、α-SMA与PDGFR-β),以明确上述抗原标记在增殖期血管瘤内皮细胞和周细胞的定位。
结果:
1.H-E染色:增生期血管瘤细胞团中有大量周细胞,周细胞与内皮细胞聚集成团,细胞团中可见少量新生微血管;增生晚期,血管瘤细胞数减少,血管数量增多,管壁变薄,管腔增大;消退期,血管瘤呈微血管团样结构,管壁薄,管腔大;消退完成期,绝大部分血管消失,被纤维脂肪组织代替,内含少量小动静脉,形态正常,部分遗留真皮下微血管扩张。
2.电镜:观察2例增殖期血管瘤的超微结构。可见血管瘤内微血管数量多,管径大小不一,有数量不等的内皮细胞围绕形成管壁,内皮细胞胞核饱满,核浆比大。内皮下基底膜结构清晰,基底膜呈板层样结构。基底膜内可见数量不等的周细胞;细胞核大,不规则;胞浆内可见较多线粒体和内质网等结构。内皮细胞和周细胞紧密接触,可见突触相互嵌合。
3.TUNEL染色:增生各阶段血管瘤组织中都有凋亡细胞,呈散在或小群分布,分布特点是:增生早期和中期,微血管细胞及间质中的血管瘤细胞均有凋亡,不能分辨内皮细胞和周细胞;增生晚期凋亡细胞很多,可见一些由2~3层细胞围绕的微血管,微血管壁外层周细胞发生凋亡;消退期血管瘤微血管壁和间质中仍有凋亡细胞,数量明显减少。
4.普通免疫组化染色
(1)CD31:IH各期血管内皮均呈阳性表达CD31,以增殖期表达最为强烈。
(2)α-SMA-增殖期IH表达α-SMA较为明显,主要出现在血管周围。消退期表达明显下降,围绕血管壁呈现出不连续的线状。消退完成期组织中的正常血管壁的表达较强。
(3)PDGF-B:增殖期IH血管团中PDGF-B表达较强,围绕微血管壁分布。消退期部分周细胞和间质细胞表达PDGF-B,少数内皮细胞表达PDGF-B。
(4)PDGFR-β:增殖期IH中PDGFR-β的表达较强,定位不甚清楚。在消退期其表达显著降低,部分微血管壁周细胞和间质细胞表达PDGFR-β,部分病变区域几乎看不到其表达,内皮细胞基本不表达PDGFR-β。
5.荧光免疫组织化学双染色
(1)CD31与α-SMA:CD31表达于内皮细胞胞膜,α-SMA表达于周细胞胞浆,定位清楚。
(2)CD31与PDGF-B:CD31表达于内皮细胞。PDGF-B在内皮细胞和周细胞均有表达,定位于胞浆中和,或胞膜。
(3)α-SMA与PDGFR-β:α-SMA与PDGFR-β均定位于周细胞胞浆和/或胞膜。内皮细胞不表达PDGFR-β。
结论:
(1)内皮细胞和周细胞的分布:内皮细胞和周细胞是增殖期婴幼儿血管瘤的主要组成细胞。两种细胞共同组成微血管,微血管形态和数量的变化贯穿血管瘤病理演变过程。内皮细胞和周细胞的凋亡在微血管塑形和消亡过程中有重要作用。
(2)血管瘤中周细胞的来源:早期血管瘤中存在大量周细胞,荧光免疫组织化学双染色证实PDGF-B在内皮细胞和周细胞均有表达,PDGFR-β仅表达于周细胞,结果提示PDGF-B和PDGFR-β可能在血管瘤内皮细胞募集周细胞的过程中扮演了重要角色。