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目的:研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的H9c2细胞损伤的信号通路及白藜芦醇(resveratrol,RSV)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的H9c2细胞损伤的影响及相关机制。方法:1.将H9c2细胞随机分为实验组(Con),白藜芦醇5μM组(R5),白藜芦醇10μM组(R10),白藜芦醇20μM组(R20),白藜芦醇50μM组(R50)。其中Con组不做任何处理,R5组、R10组、R20组、R50组分别用5μM、10μM、20μM、50μM的白藜芦醇处理24h,MTT法检测H9c2细胞增殖能力。2.将H9c2细胞分为对照组(Con),脂多糖组(LPS),脂多糖+白藜芦醇5μM组(L+R5),脂多糖+白藜芦醇10μM组(L+R10),脂多糖+白藜芦醇20μM组(L+R20),脂多糖+白藜芦醇50μM组(L+R50)。其中Con组不做任何处理,L+R5组、L+R10组、L+R20组、L+R50组分别用5μM、10μM、20μM、50μM的白藜芦醇预先处理24h,然后将LPS组、L+R5组、L+R10组、L+R20组、L+R50组和10μg/ml的脂多糖共同培养12h。MTT法检测H9c2细胞增殖能力。3.将六孔板培养的H9c2心肌细胞放置在37℃5%CO2培养箱中孵育24h后,用LPS 10μg/ml处理0 min,5min,10min,20min,30min,60min后,评估LPS在不同时间点对H9c2细胞表达p-P38,P38p-JNK1/2,JNK1/2,p-ERK1/2,ERK1/2,IκBα,p-p65,p65,β-actin的影响。4.将H9c2细胞分为对照组(Con),脂多糖组(LPS),脂多糖+白藜芦醇5μM组(L+R5),脂多糖+白藜芦醇10μM组(L+R10),脂多糖+白藜芦醇20μM组(L+R20),脂多糖+白藜芦醇50μM组(L+R50)。其中Con组不做任何处理,L+R5组、L+R10组、L+R20组、L+R50组分别用5μM、10μM、20μM、50μM的白藜芦醇预先处理24h,然后将LPS组、L+R5组、L+R10组、L+R20组、L+R50组和10μg/ml的脂多糖共同培养20min。Western blot检测p-P38,P38,p-JNK1/2,JNK1/2,p-ERK1/2,ERK1/2,IκBα,p-p65,p65,β-actin的表达水平。5、将H9c2细胞随机分为Con组、LPS组、RSV组、L+R5组;其中RSV组、L+R5组用5μM RSV预先处理24 h,再将LPS组和L+R5组用10μg/mL的LPS共同处理12 h。免疫荧光法检测H9c2心肌细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。流式细胞术检测H9c2心肌细胞凋亡。ELISA法检测细胞质中TNF-α的表达。结果:1)低浓度的白藜芦醇对H9c2细胞的影响不大,但是较高浓度(50μM)的白藜芦醇对H9c2细胞增殖有明显抑制作用(P<0.05)。2)与对照组相比,LPS刺激12h能对H9c2细胞增殖产生明显抑制作用,5μM的白藜芦醇预先处理24h能显著减弱LPS对H9c2细胞增殖的抑制作用(P<0.05)。3)将H9c2心肌细胞用脂多糖处理不同时间后,发现脂多糖刺激5min后,p-P38,p-JNK1/2,p-ERK1/2,p-p65开始升高,同时IκBα表达水平开始下调。在刺激20min时,P38,JNK1/2,ERK1/2,p65磷酸化上升水平达到最高峰(P<0.01)且IκBα下降水平同时达到最低(P<0.01),处理30min后p-P38,p-JNK1/2,p-ERK1/2,p-p65表达水平开始下降,IκBα表达水平开始上升。4)用不同浓度RSV处理H9c2心肌细胞24 h后,再用LPS处理20min,5μM RSV能够显著下调p-P38,p-JNK1/2,p-ERK1/2,p-p65表达(P<0.01);并上调IκBα表达(P<0.01),但是50μM RSV显著上调p-P38,p-JNK1/2,p-ERK1/2,p-p65表达(P<0.01),并下调IκBα表达(P<0.01)。5)与Con组相比,LPS组H9c2细胞内ROS的产生量明显增加(P<0.01);而用5μM浓度的RSV预处理后能显著降低LPS诱导的细胞内ROS的产生量(P<0.01)。6)细胞流式术检测不同组细胞凋亡的情况发现,脂多糖处理的H9c2心肌细胞凋亡数量明显增加(P<0.05),而用5μM浓度的RSV预处理后能显著降低LPS诱导的H9c2心肌细胞凋亡(P<0.01)。7)与Con组相比,LPS明显诱导TNF-α上调(P<0.05),而用5μM浓度的RSV预处理后,TNF-α的表达显著下降(P<0.05)。结论:1)脂多糖通过上调p-P38,p-JNK1/2,p-ERK1/2,p-p65的表达,下调IκBα的表达诱导H9c2细胞损伤。2)白藜芦醇通过下调p-P38,p-JNK1/2,p-ERK1/2,p-p65的表达,上调IκBα的表达来抑制脂多糖诱导H9c2细胞损伤,从而发挥保护细胞作用。