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本论文对乌药的化学成分进行了研究,共鉴定出14个化合物,其中新化合物4个;通过对不同产地乌药中Norisoboldine的含量测定、倍半萜类成分HPLC指纹图谱研究、挥发性物质的顶空GC/MS研究及无机元素的ICP/MS含量测定研究,探讨了乌药产地间的差异性。
一、乌药化学成分研究
乌药,樟科山胡椒属植物乌药Lindera aggregata(Sims.)Kosterm.的干燥块根。具有顺气止痛,温肾散寒的功效,主产于浙江、江西、安徽、湖南等省,是常用的理气止痛类中药。
本实验运用多种多种现代色谱分离技术,对乌药块根中的倍半萜类成分和异喹啉类生物碱进行了提取分离和结构鉴定。从中分离出化合物17个,结合理化和光谱数据共鉴定出14个,其中4个为新的倍半萜类化合物,分别为乌药酮酸-A(lindenone acid-A,M28-38A),乌药酮酸-B(lindenone acid-B,M28-38B),4-甲基金粟兰交酯(Shizukanolide-H,M28-38E-1),伪羟基香樟内酯(pseudohydroxylindestrenolide,M28-38E-2)。鉴定的已知化合物包括倍半萜类6个,生物碱类3个,甾醇类1个。分别为倍半萜类:乙酸乌药酯(lindenenylacetate,M5),乌药醚内酯(linderane,M17),乌药内酯(linderalactone M19),羟基香樟内酯(hydroxylindestrenolide,M30),伪新乌药醚内酯(pseudoneolinderane,M28-38R-2),乌药醚双酯(linderanine-C,M28-38R-3);生物碱类为:N-甲基六驳碱((+)-N-methyllaurotetanine,Wy-b),苍白定(Pallidine,Wy-o),去甲异波尔定(norisoboldine,Wy-1)。甾醇类为:β-谷甾醇(β-sitosterol,M21)。
二、乌药产地间差异性分析
对采集自浙江、江西、湖南、安徽四个省的十余个县市,共49个产地的乌药样品按照2010版中国药典规定的norisoboldine含量测定方法进行测定,结果表明道地产区与其它主产区之间存在一定的产地间差异。
对上述49批乌药药材进行HPLC指纹图谱研究,建立了乌药药材倍半萜类成分的HPLC指纹图谱。运用SPSS15.0软件对49批乌药样品进行聚类分析,所有样品聚成2大类。道地产区10批药材中1、2、3、4、8、9、10七个天台产地的乌药样品距离较近。进一步研究发现在所建立的倍半萜类成分的指纹图谱中,天台乌药所含的乌药醚内酯峰10与峰3峰面积比呈现出特定的比例关系,即(峰面积比值大于4:1),该指标可作为乌药产地间差异的特征指标之一。
对乌药中的挥发性物质进行顶空GC/MS实验研究,鉴别了其中相对含量较大的25个化合物。运用MVSP3.1主成分分析软件对25个共有峰的相对含量进行主成分分析。其中4个贡献率较大的共有峰可作为乌药产地间差异性分析的指标。
对道地产区和其它4个主产区的15批乌药样品,运用ICP/MS技术对20种无机元素进行了定性、定量分析,建立了乌药无机元素指纹图谱,同时确定了Fe、Ge、Ni、Cu、Se及Ba为乌药药材的无机特征元素。
综合上述研究结果,确定了用于产地间差异性分析的特征指标,采用主成分分析的方法,对这些特征性指标进行分析,能够对不同产地的乌药进行综合性评价,区分产地间差异。