论文部分内容阅读
HOX11基因属于同源异形盒基因,对于脾的发育具有关键性作用.HOX11的失控表达是T细胞急性淋巴系白血病(T-ALL)发生和发展的关键事件之一.因此HOX11的调控研究对于理解T-ALL的发生和脾发育的机制具有非常重要的意义.过去对于HOX11的表达调控研究界定了一些在5非翻译区(UTR)的转录调控元件.由于很多早期反应基因在转录后水平受到严格调控,而HOX11基因作为延迟早期反应基因,在转录后水平可能也受到调控,这种调控的关键分子基础在于其mRNA非翻译区存在的顺式作用元件.序列分析发现HOX11 mRNA 3UTR含有与某些真核生物mRNA 3UTR中出现的AU-Rich Element(ARE)元件类似的富含AU区域.为了用RNA-蛋白质特异性结合分析研究此富含AU区的特性,建立了一种非同位素标记的定量凝胶阻滞分析技术(EMSA);克隆构建了HOX11 mRNA 3UTR的体外转录载体并制备了所需的RNA.EMSA分析表明HOX11 mRNA 3UTR和RNA结合蛋白HuR具有特异性的结合,这种特异性结合能被含有典型ARE元件的RNA转录物AUFL所竞争,表明HOX11 mRNA 3UTR和HuR特异性作用的结合部位或作用方式同ARE-HuR特异性相互作用相类似,缺失富含AU区的HOX11 mRNA 3UTR与HuR的EMSA分析发现其特异性相互作用出现了极为显著的下降,表明此富含AU区是和HuR蛋白结合的主要结合区域.研究的结果表明HOX11 mRNA 3UTR区中的ARE类似区域很可能作为特定的转录后调控元件,通过和相应蛋白因子的相互作用,在转录后水平对HOX11的表达发挥调控作用.