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颅内出血是一种非常常见和致命的脑血管疾病，亦是新生儿尤其是早产儿常见的神经系统疾病。如患者能幸存，也常因脑水肿及脑实质内血肿触发的一系列神经生物反应而导致严重神经系统损伤，尤其是新生儿，可遗留永久性的脑损伤，如脑瘫、智力低下、癫痫等。铁，作为血红蛋白的降解产物，在许多疾病的神经损害中起着关键作用，脑内铁含量的增加可导致脂质过氧化和自由基产生。已有研究表明，铁及其氧化损伤引起颅内出血后迟发性脑水肿形成。参与铁储存和转运的蛋白，如铁蛋白(ferritin)、转铁蛋白(Transferrin，Tf)和转铁蛋白受体(Transferrin Receptor，TfR)可能参与了铁诱导的细胞和神经毒性。因此，理解脑内铁转运及调节的机制及其对大脑功能的影响，对我们理解相关疾病，有着重要意义。 颅内出血也常见于缺铁性贫血情况下，尤其是发育中大脑，如早产、医源性失血等。因此，本研究目的为比较有缺铁性贫血(IDA)和无缺铁性贫血(non-IDA)的发育中大鼠颅内出血(ICH)后的脑水肿、脑内转铁蛋白、转铁蛋白受体和铁蛋白的表达及行为的变化，以探讨缺铁性贫血对发育中大鼠颅内出血后脑内Tf、TfR和Ferrtin表达的影响及其与脑损伤和行为改变的可能关系。浙江大学硕士学位论文方法第一部分:缺铁性贫血对大鼠颅内出血后脑水肿的影响 12只SD雄性大鼠随机分成2组，缺铁性贫血(IDA)接受铁缺乏饮食(3一6mg铁/kg)，对照组(非缺铁性贫血组，non一IDA)接受铁适量饮食(40 mg铁/kg)。IDA模型建立后，采用立体定位法对两组实验动物建立颅内出血(ICH)模型，即应用微量注射泵缓慢注入1 00ul自体全血形成右脑基底节血肿。ICH后第3天取大脑标本，即距脑前端4mm处取3mm厚脑冠状切片，切片分成4部分:同侧(损伤侧)、对侧(非损伤侧)基底节和损伤侧、非损伤侧皮层，取小脑作为对照。测定区域性脑水肿，脑水含量以(湿重一干重)/湿重表示。第二部分:颅内出血后转铁蛋白(丁f)、转铁蛋白受体(下fR)的表达和变化 32只SD雄性大鼠随机分成2组，同上法建立缺铁性贫血(IDA)和对照(非缺铁性贫血，non一IDA)动物模型，再建立颅内出血(I CH)模型。每组、每时间点4只鼠分别在ICH后第1，3，7和28天同上法取左、右脑基底节和皮层进行westem blot分析，检测IDA组和对照组颅内出血后转铁蛋白、转铁蛋白受体的表达和不同时间点的变化。第三部分:颅内出血后铁蛋白(Fer:itin)的表达 24只SD雄性大鼠随机分成2组，同上法建立缺铁性贫血(roA)和对照(非缺铁性贫血，non一IDA)动物模型，再建立颅内出血(ICH)模型。每组、每时间点3只鼠分别在术后第1，3，7和28天取全脑制备冰冻切片进行免疫组化和免疫荧光双标研究，_观察IDA组和对照组颅内出血后铁蛋白的表达情况和铁蛋白阳性细胞类型。第四部分:颅内出血后的行为变化 对8只IDA假手术组SD雄性大鼠，及以上第一、第二、第三部分实验的所有动物，在术前和ICH术后第3，7，14和28天进行双前肢的行为评估。方法采浙江大学硕士学位论文用两个不同的对感觉运动敏感的行为测试:触须前肢放置和前肢圆柱体试验。结果.ICH后IDA组和非IDA组血球压积比较二在ICH手术时及术后恢复期，IDA组鼠的血球压积(Hct)均较非一IDA组鼠明显下降(17.0 vs 43.0 g/dl，p<0.001)。2.ICH后IDA组和非IDA组大脑水含量的比较: ICH术后第3天，IDA组鼠的受损侧基底节和受损侧皮层的脑水含量(分别为 81，8士0.17和80.6士0.2)较非一IDA组鼠明显升高(分别为80.6士0.40和79.8士 0 .20)，P<0.05。3 .ICH后IDA组和非IDA组转铁蛋白(Tf)表达和不同时间的变化:(1) ICH后不同时间点两组(IDAvS非IDA)Tf表达的比较:IDA组鼠右侧基 底节Tf浓度在颅内出血后第1和第7天较非IDA组鼠分别增高33%和 16%，差异有显著性印<0 .05)。(2)ICH后Tf表达随时间的变化情况:IDA右基底节Tf表达在颅内出血后24 小时达高峰，此后随时间逐渐下降，至第7，28天分别降至高峰水平的46% 和27%。经同类和异源协方差模式分析，IDA组和非roA组右基底节Tf 表达在ICH后24小时一3天达高峰，以后均随时间而下降，其变化趋势一 致，但变化幅度不一样。4.ICH后IDA组和非IDA组转铁蛋白受体(TfR)表达和不同时间的变化:(1)ICH后不同时间点两组(IDA vs非IDA)TfR表达的比较:IDA组鼠右侧基 底节T仅浓度在颅内出血后第1和第3天较非IDA组鼠分别增高91%和44%， 差异有显著性(p<0.05)。(2)ICH后TfR表达随时间变化:IDA右基底节TfR表达在颅内出血后24小时 达高峰，此后随时间逐渐下降，至第7，28天分别降至高峰水平的67%和57%， 此时与非IDA组比较已无显著差异。经同类和异源协方差模式分析，非IDA 3浙江大学硕士学位论文组右基底节TfR表达随时间变化趋势不明显。5.ICH后IDA组和非IDA组铁蛋白的表达: 免疫组化示IDA组的铁蛋白(Ferritin)阳性表达明显多于非IDA组，并在ICH后第7天达高峰