论文部分内容阅读
目的:本研究采用慢性不可预见性轻度应激抑郁模型大鼠为研究对象,从行为学角度探讨针刺疗法的抗抑郁作用,以GLU/GABA平衡调节系统为切入点,通过检测大鼠海马GLU(谷氨酸)和GABA(γ-氨基丁酸)含量及NMDA受体亚单位蛋白表达水平来研究GLU/GABA兴奋/抑制平衡调节系统在抑郁状态下病理改变的分子机制,探讨针刺抗抑郁作用的中枢机制及分子靶点,初步为针刺治疗抑郁症提供科学依据和应用基础。方法:选120只SD大鼠,雌雄各半,随机分为空白对照组、抑郁模型组、丙戊酸钠治疗组、氟西汀治疗组、针刺穴位组和针刺非穴组,每组20只。除空白对照组外,其余五组均采用慢性不可预见性轻度应激抑郁模型(the chronic unpredictable mild stress,CUMS)法造模。造模同时,针刺穴位组给针刺大鼠“百会”、“内关”、“三阴交”穴位;针刺非穴组给在上述3穴位旁的非穴位点进行针刺,针具、针刺方法、留针时间及疗程均同针刺穴位组;丙戊酸钠组给丙戊酸钠300mg/kg体重,溶于2m1纯净水中灌胃;氟西汀组给氟西汀1.8mg/kg体重,溶于2m1纯净水中灌胃。不同的治疗方法,每日一次,连续21天。所有大鼠于实验开始第1天及第21天称量大鼠体重和测定蔗糖水消耗量,比较各组体重和蔗糖水消耗的变化;于实验前,及实验第7、14、21天不同时点,观察大鼠行为学改变。实验结束后取各组大鼠海马,检测各组样本中GLU、GABA含量和NR1、NR2A、NR2B和GABAA受体的蛋白表达水平。结果:1体重的影响造模前,各组间大鼠体重无明显差异(P>0.05)。在造模第21天时,模型组体重明显低于空白对照组(P<0.01)。而丙戊酸钠组、氟西汀组和针刺穴位组体重与空白对照组比较则无显著性差异(P>0.05)。但丙戊酸钠组体重较针刺穴位组明显增加(P<0.05),而非穴针刺穴位组与模型组无显著差异(P>0.05)。2行为学的影响2.1蔗糖水消耗的影响造模前,测定各组大鼠1%蔗糖水消耗量的差异无统计学意义(P>0.0 5)。比较空白对照组,模型组造模第21天测定1%蔗糖水消耗量明显降低,且差异有统计学意义(P<0.0 1);与模型组比较,氟西汀组、丙戊酸钠组和针刺穴位组3个治疗组明显增加,差异有统计学意义(P<0.0 1),且3组间比较无统计学差异(P>0.0 5)。2.2 Open-field法行为测定结果的影响连续造模21天后,模型组大鼠的水平运动和垂直运动的次数均显著低于空白对照组(P<0.01);氟西汀组、丙戊酸钠组和针刺穴位组3个治疗组大鼠的水平运动和垂直运动的次数均显著高于模型组,差异有统计学意义(P<0.01);与针刺穴位组比较,氟西汀组、丙戊酸钠组的水平运动次数均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);丙戊酸钠组和针刺穴位组的垂直运动次数均明显低于氟西汀组,差异有统计学意义(P<0.01);针刺穴位组与丙戊酸钠组比较,其垂直运动次数则无显著性差异(P>0.05)。3免疫组化染色检测结果的影响3.1抑郁模型大鼠海马CA1区GLU和GABA阳性神经元表达的影响造模21天后,与空白组比较,模型组大鼠海马CA1区的GLU阳性神经元表达明显增加(P<0.01),而GABA阳性神经元表达明显减少(P<0.01),提示:慢性不可预见性应激造模可致大鼠海马CA1区GLU含量增加,GABA含量减少;与模型组相比,丙戊酸钠组和针刺穴位组GLU阳性神经元表达显著下降(P<0.01),而GABA阳性神经元表达无显著改变(P>0.05),且丙戊酸钠组和针刺穴位组间无显著差异。提示:丙戊酸钠和针刺穴位可有效改善慢性不可预见性应激导致的大鼠海马CA1区GLU含量增加,而氟西汀和针刺非穴位则无此作用。3.2抑郁模型大鼠海马CA3区GLU和GABA阳性神经元表达的影响造模21天后,与空白组比较,模型组大鼠海马CA3区的GLU阳性神经元表达明显增加(P<0.01),而GABA阳性神经元表达明显减少(P<0.01),提示:慢性不可预见性应激造模可致大鼠海马CA3区GLU含量增加而GABA含量减少;与模型组相比,丙戊酸钠组和针刺穴位组GLU阳性神经元表达显著下降(P<0.01),丙戊酸钠组较针刺穴位组下降更为显著,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,丙戊酸钠组和针刺穴位组GABA阳性神经元表达显著升高(P<0.01,P<0.05),但丙戊酸钠组和针刺穴位组间无显著差异(P>0.05)。提示:丙戊酸钠和针刺穴位可有效改善慢性不可预见性应激所致大鼠海马CA3区的GLU含量增加和GABA含量减少,而氟西汀和针刺非穴位则无此作用。丙戊酸钠在降低GLU含量方面作用优于针刺穴位。4 Western Blot法检测NMDA受体亚单位结果的影响造模21天后,与空白组比较,模型组大鼠海马NMDA受体亚单位NR1和NR2A蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,丙戊酸钠组和针刺穴位组NR1和NR2A蛋白表达水平显著降低(P<0.01,P<0.05),丙戊酸钠组和针刺穴位组间无显著差异(P>0.05),而氟西汀组和针刺非穴组无显著差异(P>0.05)。6组间NR2B和GABAAR蛋白表达水平无显著差异(P>0.05)。结论:1针刺百会、内关、三阴交穴位对抑郁模型大鼠的抑郁状态具有良好的治疗作用,其作用与氟西汀和丙戊酸钠相当,而针刺非穴位则无此作用。2针刺百会、内关、三阴交穴位的抗抑郁作用与调整海马脑区GLU和GABA的含量失衡有关,其作用不如丙戊酸钠显著,而氟西汀和针刺非穴位则无此作用。3针刺百会、内关、三阴交穴位的抗抑郁作用与减少海马NMDA受体亚单位NR1和NR2A的蛋白表达,从而减轻GLU的兴奋性毒性有关,其作用与丙戊酸钠相当,而氟西汀和针刺非穴位则无此作用。