【摘 要】
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本试验以课题组前期调查的平蒂形(Flat Type, FT)和凸蒂形(Prominent Type,PT)黄果柑(Citrus cultivar cv. Huangguogan)为研究材料,为研究调控其果蒂性状的内在机理,试验首
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本试验以课题组前期调查的平蒂形(Flat Type, FT)和凸蒂形(Prominent Type,PT)黄果柑(Citrus cultivar cv. Huangguogan)为研究材料,为研究调控其果蒂性状的内在机理,试验首先通过常规的果实品质分析方法,分析比较了两种类型的黄果柑在成熟期时的果实品质差异情况,紧接着从ISSR分子标记手段研究两者是否在遗传物质上发生了改变,同时结合荧光定量PCR研究了调控细胞壁代谢的相关酶关键基因XET,分析了其生物学信息及在分别在平蒂形(FT)和凸蒂形(PT)黄果柑中的表达水平,分析它与该性状的关系。最后结合RNA-Seq转录组测序的手段分析了FT和PT在两个生长发育阶段差异基因的表达情况,研究结果表明：1.通过对比先锋乡和丰乐乡当地成熟期时平蒂形(FT)与凸蒂形(PT)黄果柑果实品质,发现从总糖含量和糖酸比上,FT比PT均有优势。设计的引物无法用ISSR-PCR分子标记方法将两者区分开来,可能两者并没有遗传物质上的差异。2.通过改良的CTAB法提取黄果柑果皮总RNA,然后反转录为cDNA,并设计XET基因扩增引物,克隆出黄果柑中的XET基因(CitXET),分析其生物学信息,另外设计CitXET基因的定量PCR引物,以反转录的cDNA为模板,研究CitXET基因在FT和PT黄果柑果皮中的表达水平。结果表明：黄果柑XET基因全长960 bp,与其它植物序列具有较高的同源性。该基因编码319个氨基酸,蛋白质分子量为37.4547 kDa,等电点为9.05,分子式为C1724H2548N448O466S14,是一个具有跨膜结构的亲水性蛋白。序列比对及进化树分析,XET在进化的过程中具有高度的保守性。CitXET具有GH16等结构域,属于糖苷水解酶GH16超家族的成员,其含有该家族的特征基序DEIDFEFLG。荧光定量显示CitXET在两种类型的黄果柑中有差异表达,但并没达到显著水平,说明CitXET并没在黄果柑果蒂差异性状中起到关键的调控作用,有可能是有多基因共同调控。3.通过RNA-Seq测序在黄果柑的两个生长时期分别获得483个、284个显著表达基因,同时这些基因被分别富集到了42个、31个GO功能分类中。通过两个生长时期的代谢通路比较,发现有可能是激素水平和细胞壁代谢引起的果蒂性状差异。
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