论文部分内容阅读
目的：
1、对复方中药JW提取物进行HPLC指纹图谱研究，控制JW提取物质量。
2、考察氢可肾阳虚大鼠体内CRH、ACTH、皮质醇、睾酮、T4含量的变化，以及JW 复方中药对模型大鼠体内这些激素含量的影响。考察氢可肾阳虚模型大鼠下丘脑CRH基因和垂体POMC基因的表达以及POMC含量的变化，并考察JW复方中药对其产生的影响。最后根据药理和分子生物学实验的结果初步阐明JW复方中药对肾阳虚大鼠的作用机制。
方法：
1、复方中药JW提取物质量控制研究部分该部分实验主要对复方中药JW提取物进行了HPLC指纹图谱研究，开展了溶剂萃取方法、色谱柱、流动相、3小时、空针、全波长扫描考察，确定检测方法后进行了精密度、稳定性、重现性的方法学研究，最后通过对十批样品的检测分析，建立了相似度比较的对照指纹图谱以及相似度评价标准。
2、药理实验部分本实验采用氢可肾阳虚动物模型，给予淫羊藿苷和三个剂量组的复方中药JW提取物，观察动物体征变化，RIA法检测动物血中CRH、ACTH、皮质醇、睾酮、T4含量，检测数据采用SPSS10.0统计软件包进行数据的统计学分析。
3、分子生物学实验部分本实验采用 RT-PCR 法检测下丘脑 CRH 基因和垂体 POMC 基因的表达，采用WESTERN-BLOT 方法检测垂体POMC蛋白的表达，光密度结果通过与内参基因或内参蛋白的参比处理后，利用SPSS10.0统计软件包进行数据的统计学分析。
结果：
1、建立了复方中药JW提取物HPLC指纹图谱检测方法标准和相似度评价标准。
2、药理学实验结果表明，肾阳虚模型动物的体征变化符合中医肾阳虚动物模型特征，给药后有改善作用。在显著水平0.05时，动物体内激素如T4、睾酮、皮质醇、CRH、ACTH 含量也都有较显著的变化，并且给予药物治疗能对这些激素水平起到逆向调节作用。
3、分子生物学实验结果显示，肾阳虚大鼠下丘脑CRH基因和垂体POMC基因的表达较正常大鼠有较显著变化，给予药物对CRH和POMC基因的表达有较显著影响。
结论：
1、HPLC指纹图谱能够较好地控制复方中药JW提取物的质量。
2、肾阳虚与下丘脑．垂体．肾上腺轴的功能紊乱有关，伴随甲状腺、性腺等内分泌网络的改变。给予JW复方中药能对下丘脑、垂体。肾上腺轴的功能起到调节作用，该作用可能是通过调节CRH-POMC基因表达这一途径实现的。