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目的通过基因工程技术获得大量纯化的重组表皮剥脱毒素A,为进一步研究表皮剥脱毒素的致病机理及机体的免疫保护作用提供实验材料,为更有效地防治葡萄球菌性烫伤样皮肤综合征奠定基础。方法根据Gene Bank公布的eta基因序列,用premier premier5.0软件设计引物,利用PCR技术从S. aureus基因组中扩增eta基因,插入原核表达载体pQE30中,转化表达受体菌大肠杆菌M15;SDS-PAGE分析其表达效果,优化诱导表达条件;Western blot鉴定其抗原性。重组蛋白经Ni-NTA2+树脂纯化后,注入BALB/C小鼠皮下鉴定其生物学活性。结果1.重组表达质粒pQE-ETA构建成功,序列分析显示插入的基因片段全长927bp,与基因文库中的eta基因完全吻合;2. SDS-PAGE显示表达产物相对分子量约为27 KD,重组表达质粒pQE-ETA在IPTG终浓度0.1mmol/L,诱导时间4h,可得到最大的表达量,表达量约为12%;3、Western blot法显示该蛋白具有良好的抗原性。4、Ni2+-NTA树脂纯化可溶性的重组蛋白,可得到纯度90%以上的蛋白质。5、动物实验显示其有生物学活性。结论ETA毒素片段表达成功,获得高纯度重组蛋白并具有良好的抗原性及生物学活性,为诊断SSSS感染、研究其致病机理和制备抗体提供了可靠的材料。目的通过检测血清中抗ETA和抗ETB抗体的浓度以及利用新生小鼠SSSS模型来研究抗ET抗体的免疫保护作用,为临床上治疗和预防SSSS提供新的思路。方法1、间接ELISA法检测商品化IVIg及患者血清中抗ETA和抗ETB抗体的浓度。2、用纯化的重组ETA制备SSSS小鼠模型,观察给予抗ETA抗体小鼠组和未予抗体组间的差异。结果1、无论是在商品化IVIg中还是在人类血清中,抗ETA抗体的浓度大大高于抗ETB抗体的浓度。2、SSSS患儿组、AD患儿组以及正常儿童对照组血清抗ETA抗体的滴度没有显著差异。3、SSSS患儿组、AD患儿组以及正常儿童对照组血清抗ETB抗体的滴度有显著差异,SSSS患儿组明显低于AD患儿组以及正常儿童对照组。4、使用了抗ETA抗体组小鼠无论是大体体征、组织病理检查还是死亡率都明显优于未用抗体组。5、早期使用抗ETA抗体组的治疗效果明显好于6小时后再用抗体治疗组。结论1、临床上泛发型SSSS主要由ETB引起,这可能与人群血清中抗ETA抗体浓度大大高于抗ETB抗体浓度有关。2、SSSS患儿组血清抗ETB抗体的滴度明显低于AD患儿组以及正常儿童对照组,该组患儿没有足够抗体的保护可能是其患SSSS原因之一。3、通过小鼠SSSS模型证实抗ET抗体有免疫保护作用。