论文部分内容阅读
脑水肿是引起严重烧伤患者死亡的主要原因,但脑水肿症状往往被其它并发症掩盖,容易被医生忽视。过去的研究表明:严重烧伤后脑水肿的形成与血脑屏障损害是密切相关的,其发生率与烧伤的严重程度成正比。但烧伤后血脑屏障损害及脑水肿形成的机制尚不完全明了。本研究目的是探讨严重烫伤对大鼠血脑屏障的损害及其调控机制;为如何防治脑水肿的形成,减少患者死亡率提供新的思路。方法与内容:第一部分研究严重烫伤大鼠血脑屏障的结构损害与脑水肿之间的关系,用透射电镜观察大鼠脑组织内神经元、突触及血脑屏障超微结构的改变。第二部分用紫外分光光度计检测各组大鼠脑组织内伊文氏蓝(Evans blue,EB)的含量、测量脑组织的脑百分含水量,探讨严重烫伤对大鼠血脑屏障通透性的损伤,用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)及Western免疫印迹(Western-blot)检测严重烫伤大鼠脑内ZO-1基因及蛋白的表达变化。探讨严重烫伤引起血脑屏障损伤的分子机制。第三部分用免疫组织化学方法检测严重烫伤大鼠模型脑内明胶酶B(MMP-9)及胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达变化,探讨MMP-9及GFAP与严重烫伤后血脑屏障损伤之间的关系。第四部分观察运用一氧化氮合酶抑制剂L-硝基-精氨酸甲酯(NG-nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME)、钙通道阻滞剂尼莫地平(Nimodipine)对烫伤大鼠血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)的保护作用。为临床上防治严重烫伤对血脑屏障损害及脑水肿的形成提供新的思路。结果:严重烫伤大鼠脑内EB含量、脑百分含水量明显增高, MMP-9及GFAP阳性表达升高,ZO-1mRNA及蛋白表达下降,具有显著差异。电镜显示:烫伤以后脑毛细血管周围出现空泡化,内皮肿胀,基底膜厚薄不均,星形胶质细胞足突空泡化。突触数量及突触小泡减少,突触间隙增宽。用L-NAME及尼莫地平治疗后,脑EB含量及百分含水量与假烫组比较明显下降,ZO-1mRNA表达升高。经L-NAME治疗后显示MMP-9表达恢复至正常水平,脑毛细胞血管的超微结构基本恢复到正常。结论:①严重烫伤后大鼠血脑屏障通透性增高与血脑屏障的超微结构变化,突触结构异常有关。②严重烫伤后大鼠血脑屏障的通透性增高与脑内MMP-9及GFAP表达升高及ZO-1mRNA及蛋白的表达下降(P<0.01)有关,提示MMP-9、GFAP在严重烫伤对血脑屏障的损害及脑水肿的形成中起着重要的作用。③早期应用L-NAME能明显减轻烫伤对脑BBB的损伤,可能是与L-NAME能抑制MMP-9的表达,防止ZO-1mRNA表达水平降低有关。④严重烫伤后早期应用尼莫地平能防止ZO-1mRNA表达下降,并能起到保护BBB的作用。