论文部分内容阅读
目的:胃癌是人类消化系统常见的恶性肿瘤之一，在世界范围内其发病呈上升趋势。GLOBALCAN最新数据显示，2012年全球新发胃癌病例95.1万，发病率占全球恶性肿瘤第五位，死亡率为第三位，其中男女发病率之比为2-3∶1。胃癌的发病机制尚未完全明确，目前公认是由多基因多因素参与、环境和遗传因素共同作用导致，而癌转移是造成其预后差的重要原因。 Kiss-1基因最早在黑色素瘤细胞株中被发现，定位于染色体1q32-q41，编码1个亲水性蛋白、包含4个外显因子，其中亲水蛋白由145个氨基酸组成。研究证实，Kiss-1基因是多种恶性肿瘤的转移抑制基因，肿瘤的转移及预后与Kiss-1基因的表达下调关系密切。Notch基因的发现最早是在果蝇体内，其被首次克隆成功在1980年。目前，在哺乳动物中共发现4种Notch受体(Notch1、Notch2、Notch3和Notch4)。研究表明，Notch1与多种肿瘤有密切关系，在肿瘤的进展及转移中起重要的作用。目前，尚未阐明两个基因在胃癌发病过程中的作用。 本文应用RT-qPCR(real-time quantitative reverse transcription-PCR，RT-qPCR)方法检测胃癌组织及癌旁正常组织中Kiss-1 mRNA和Notch1mRNA表达情况，并经过分析其与临床病理特征（分化程度、转移、分期、预后等）之间的关系，探讨其在胃癌发生发展过程中所起到的作用，为胃癌诊治提供新的思路。 方法: 1、2013年10月～2014年10月期间，河北医科大学第一医院经病理证实胃癌住院手术患者34例，其中男性22例，女性12例，年龄49-83岁（平均年龄66.06±9.18岁），采集标本前所有的患者均没有进行放疗、化疗，以及免疫治疗。收集患者性别、年龄、TNM分期、肿瘤位置、组织学类型、淋巴结状态、浸润深度、分化程度、远处转移等临床病理资料，登记建表并签署知情同意书。分组情况:胃癌组34例标本均取自手术切除的胃癌组织;正常对照组34例标本均取自距肿瘤边缘5cm及以上的正常胃黏膜组织。34例标本均在病理组织学诊断证实后最终选取。 2、TrizoL法提取34例胃癌组织及34例癌旁正常组织中的总RNA。 根据美国GeneCopoeia公司提供的反转录试剂盒操作说明书进行反转录。RT-qPCR检测癌组织及癌周边正常组织中的Kiss-1 mRNA、Notch1 mRNA的表达，引物购自美国GeneCopoeia公司，按说明书操作。反应条件:95℃预变性10 min，然后按95℃15s，60℃30s，72℃10s，进行40个循环，重复3次取平均值。本研究靶基因的表达量采用2-△CT表示，其中△CT为CT靶基因与CTGAPDH的差值。 3、统计学处理 采用SPSS16.0统计软件进行统计分析，数据以中位数（四分位数间距）表示，两组间配对样本采用Wilcoxon秩和检验，两组间独立样本采用Mann-Whitney U检验，均以P＜0.05为差异有统计学意义。 结果: 1、Kiss-1 mRNA在胃癌组中的表达较正常对照组显著降低，组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。 2、Kiss-1 mRNA在胃癌有淋巴结转移组、TNM分期Ⅲ-Ⅳ期组中的表达显著低于无淋巴结转移组及TNM分期Ⅰ-Ⅱ期组，组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。 3、Notch1 mRNA在胃癌组中的表达较正常组显著升高，组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。 4、Notch1 mRNA在胃癌有淋巴结转移组及TNM分期Ⅲ-Ⅳ期组中的表达显著高于无淋巴结转移组及Ⅰ-Ⅱ期组，组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。 5、Notch1 mRNA在胃癌低分化组的表达显著高于高分化组，组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。 6、Kiss-1 mRNA与Notch1 mRNA的表达均与患者性别、年龄、病理类型等无明显相关性，组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。 结论: 1、Kiss-1 mRNA在胃癌组织中的表达较癌旁正常组织显著下调，提示其在胃癌发病过程中可能发挥抑癌作用。 2、Kiss-1 mRNA的表达与胃癌分期及转移密切相关，提示其可能通过抑制胃癌的转移来影响预后。 3、Notch1 mRNA在胃癌组织中的表达较癌旁正常组织显著上调，提示其在胃癌发病过程中可能发挥促癌作用。 4、Notch1 mRNA的表达与胃癌的分期、淋巴结转移及其分化程度密切相关，进一步提示Notch1 mRNA的高表达促进了胃癌进展，有潜力成为胃癌早期诊断的新型肿瘤标记物用于胃癌的早期诊断。