【摘 要】
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本论文建立了高效毛细管电泳（HPCE）和高效液相色谱（HPLC）对乳制品中α-乳白蛋白（α-Lac）、乳球蛋白A （β-LgA）及β-乳球蛋白B （β-LgB）测定的方法,并利用建立的CE方法对一些乳制品中上述三种蛋白含量进行了检测,同时在CE方法中,研究了不同浓度醋酸和三氯乙酸对乳制品中的蛋白去除效果。文章最后部分利用高效毛细管电泳和亲合液相色谱对保健食品中免疫球蛋白G （IgG）进行了测定,主
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本论文建立了高效毛细管电泳（HPCE）和高效液相色谱（HPLC）对乳制品中α-乳白蛋白（α-Lac）、乳球蛋白A （β-LgA）及β-乳球蛋白B （β-LgB）测定的方法,并利用建立的CE方法对一些乳制品中上述三种蛋白含量进行了检测,同时在CE方法中,研究了不同浓度醋酸和三氯乙酸对乳制品中的蛋白去除效果。文章最后部分利用高效毛细管电泳和亲合液相色谱对保健食品中免疫球蛋白G （IgG）进行了测定,主要内容分为如下四个方面:（1）建立了高效毛细管电泳和高效液相色谱（HPLC）分离乳清蛋白中α-Lac、β-LgA和β-LgB的新方法。电泳条件:以57 cm×50μm i.d毛细管为分离柱,0.5 mol/L硼酸、25 mmol/L羟丙基-β-环糊精和0.8 g/L聚氧化乙烯4000 00（0PEO（）2 mol/L CsOH调pH值至9.1）为分离缓冲溶液,50 mmol/L醋酸为样品缓冲溶液,检测波长为214 nm。详细研究了影响三种蛋白分离的因素,如分离缓冲溶液的种类、浓度、添加剂的种类、浓度,pH值、分离电压等。α-Lac、β-LgA和β-LgB的测定精密度分别为3.5%、3.8%和6.6%,三种蛋白在50 mg/L400 mg/L范围内均具有良好的线性关系,线性相关系数分别为0.9983、0.9972和0.9974,检出限（S/N=3）分别为10、15和12 mg/L,定量限为30、50、40 mg/L。HPLC分离条件为:CAPCELL PAK C8 SG 300为分离色谱柱,以乙腈、三氟乙酸和氯化钠的水溶液为流动相,采用梯度程序洗脱。由于该方法中α-Lac与乳铁蛋白（Lf）的出峰位置相同,干扰α-Lac测定,因此,该方法只能测定实际样品中β-LgA和β-LgB,两种蛋白的线性范围均为15 mg/L 500 mg/L,线性相关系数分别为0.9998和0.9997,检出限（S/N=3）分别为4 mg/L和3mg/L,定量限（S/N=10）分别为12 mg/L和10 mg/L,方法精密度分别为3.6%和3.2%。两种方法同时测定原料奶中的蛋白含量,结果无显著性差异。由于CE方法的准确度高、分离时间短、溶剂用量少,可作为分析的首选方法。（2）在上述建立的CE方法基础上对一些乳及乳制品中上述三种蛋白含量进行了检测,所测样品主要有乳清蛋白粉、牛初乳及原料奶、产于不同厂家和不同国家的液态奶、酸奶和奶粉等样品,结果表明:乳清蛋白粉中α-Lac、β-LgA及β-LgB含量最高,其次是牛初乳,然后是原料奶。液态奶中上述三种蛋白含量与保质期有关,一般保质期越久的产品,上述三个蛋白的含量越低。大多数酸奶中α-Lac的含量均高于超高温灭菌（UHT）奶。婴儿配方奶粉中α-Lac含量随着阶段数的增加而增加,而且同一阶段内不同厂家不同国别配方奶粉中α-Lac含量差异也较大,并非进口奶粉中α-Lac含量总比国产奶粉高。该研究为乳及乳制品中蛋白检测提供了有价值的参考。（3）在上述建立的CE方法基础上,着重研究了不同浓度的冰乙酸（HAc）及三氯乙酸（TCA）对原料奶、进口和国产婴儿配方奶粉及酸奶中蛋白的去除效果,结果表明:TCA除蛋白效果优于HAc,不同样品所需TCA浓度不同:2 mL原料奶需3 mL 100 g/L TCA;0.5 g进口或国产婴儿配方奶粉分别需5 mL 10 g/L及20 g/L TCA;2 g酸奶则需5 mL 20 g/L TCA才能将蛋白完全沉淀。该研究为原料奶、婴儿配方奶粉及酸奶等乳制品的样品前处理提供了有价值的参考。（4）在国标方法—亲合液相色谱检测保健食品中IgG的基础上,改进了液相色谱仪,从而改善了测定效果。利用所建立的HPCE和亲和HPLC两种方法同时检测了一批保健食品中IgG含量,利用亲和HPLC所测结果与毛细管电泳法数据进行了比较,结果表明两种方法无显著性差异,所测结果都较可靠。运用亲合液相色谱法对牛初乳、原料奶和人奶中的IgG进行了测定,为IgG研究提供了可供参考的数据。
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