论文部分内容阅读
结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是一种发病率和死亡率均排名前三位的恶性肿瘤,目前治疗结直肠癌的方法和效果极其有限。因此,研究结直肠癌发生发展的分子机制,为研发有效的抗癌药物提供理论基础,尤为迫切和重要。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是众多调控RNA中的一种。许多lncRNA在肿瘤中异常表达,这些lncRNA异常表达的原因,以及它们异常表达导致的生物学效应,目前,还有很多问题没有阐明,仍需深入研究。本研究通过生物信息学筛选发现LINC00265是一个拷贝数和基因表达水平在结直肠癌中显著增加的lncRNA,并且CRC中LINC00265高表达与临床不良预后相关。本研究首先建立稳定敲低LINC00265的4种肠癌细胞系HCT116、SW480、RKO和DLD1,进行MTT实验和裸鼠皮下成瘤实验。实验结果表明,抑制LINC00265显著抑制结直肠癌细胞的恶性增殖。通过进一步分析发现ZMIZ2的mRNA表达水平与LINC00265的正相关性最强。在肠癌细胞系HCT116和SW480中抑制LINC00265降低ZMIZ2的表达,但同时抑制LINC00265和Dicer1则能恢复和增强ZMIZ2的表达水平,Dicer是MicroRNA(miRNA)加工过程中的关键酶。在4种肠癌细胞系HCT116、SW480、RKO和DLD1中,LINC00265主要分布在细胞质。我们筛选并验证了4种miRNA能靶向结合到LINC00265和ZMIZ2 mRNA 3’UTR。在HCT116和SW480两种细胞系中分别过表达4种miRNA,通过AGO2抗体进行免疫沉淀实验,分离并检测富集的RNA,AGO2蛋白为RNA诱导沉默复合物(RNA-induced Silencing Complex,RISC)的主要成员。结果表明,与对照组相比,过表达4种miRNA后,LINC00265和ZMIZ2 mRNA均能在RISC中显著富集。以上结果说明,LINC00265作为miRNA sponge增加ZMIZ2的表达。同样,本研究建立稳定敲低ZMIZ2的肠癌细胞系。进行MTT实验和裸鼠皮下成瘤实验,实验结果表明,抑制ZMIZ2抑制肠癌细胞的恶性生长,过表达ZMIZ2促进肠癌细胞的恶性生长。抑制LINC00265同时过表达ZMIZ2则能恢复细胞恶性增殖能力。此外,本研究分析TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库中病人样本,发现结直肠癌中ZMIZ2表达上调,并且其高表达与临床不良预后相关。综上所述,在肠癌细胞系中抑制LINC00265和ZMIZ2的表达,显著抑制肠癌细胞生长和皮下成瘤能力,表明LINC00265和ZMIZ2的高表达维持了结直肠癌的恶性增殖。并且LINC00265作为miRNA sponge增加ZMIZ2表达介导了结直肠癌的恶性增殖,这些研究有助于揭示长链非编码RNA促进结直肠癌发生发展的分子机制。