萝卜籽中硫代葡萄糖苷的提取纯化及其降解产物的抑菌特性研究

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硫代葡萄糖苷(简称硫苷)是存在于天然植物中一种重要的次生代谢产物,广泛存在于十字花科植物的根、茎、叶和种子等组织中,尤其在种子中的含量特别高。此类化合物会在芥子酶存在的条件下发生酶解反应,或高温高压条件下发生非酶降解反应。硫苷及其降解产物具有广泛的生物活性,特别是抗肿瘤和抑菌活性已受到了国内外学者的广泛关注和证实。因此,加强对十字花科植物中硫苷的研究和利用,开发更有价值的产品,不仅将对人类攻克癌症顽疾、延长寿命产生积极而深远的影响,也会对生态环境产生直接或间接的效益。本论文选取十字花科植物一点红萝卜籽中的硫苷为研究对象,重点研究它的最优提取纯化工艺条件以及其降解产物的抑菌特性等方面。为萝卜籽硫苷特性的深入研究提供参考,同时也为萝卜籽的工业化开发利用提供理论依据。通过一系列的实验研究,本文获得了以下结论:1、采用单因素实验和正交优化试验,得到乙醇溶剂法提取萝卜籽中硫苷的最佳工艺条件为:脱脂预处理、乙醇浓度为70%、料液比为1:5、提取时间为20min、提取温度为70℃、提取次数为3次。通过验证试验得到硫苷含量占42.88%的萝卜籽粗提物,粗提物粉末得率为12.34%。采用加速法研究了萝卜籽硫苷提取物软胶囊的稳定性,与对照组相比,试验组的硫苷降解速度较缓,说明软胶囊介质对硫苷的稳定性具有一定的保护效果。2、通过静态法比较了7种食品级填料柱和6种洗脱剂对硫苷的吸附、洗脱效果,发现A、B对提取液中的硫苷吸附能力都非常低,吸附率分别为0.35%和3.35%,可以选为固相吸附剂吸附液体样品中的干扰物,而分离获得目标化合物硫苷;而C对硫苷吸附率达99.58%,可作为固定相吸附液体样品中的硫苷,使其与干扰物分离,然后可通过95%乙醇进行多次洗脱,最后达到分离和富集纯化硫苷的目的。3、选取革兰氏阳性、阴性、酵母(类酵母)、霉菌代表共6种菌,研究硫苷降解产物提取液对其的抑菌效果。发现硫苷降解产物对大肠杆菌的抑菌效果最为突出,2.514mg/g (4MIC)浓度即可达到极敏水平,而1.676mg/g (2MIC)和0.838mg/g (MIC)稀释浓度的提取液对大肠杆菌的抑菌效果也达到了高敏水平;提取液原液(3.352mg/g)对枯草芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌的抑菌效果也达到了高敏水平;而提取液对青霉菌和酿酒酵母不具有抑菌效果。4、从细胞水平着重研究了硫苷降解产物对大肠杆菌的抑菌机理。实验发现硫苷降解产物是通过影响大肠杆菌膜的通透性、细胞物质以及抑制核酸合成三个方面来共同完成对其的抑菌功能。硫苷降解产物首先与细胞膜作用,使其通透性增加,从而使细胞内容物外渗,核酸等合成受到阻碍,导致细胞生理代谢失常,随后逐渐死亡
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