【摘 要】
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该文将ICA69编码基因重组到表达型质粒pGEX-2T中,经过酶切鉴定,筛选出阳性重组子,通过序列分析证实ICA69表达型重组质粒5端多克隆位点与重组片段衔接处的核苷酸顺序正确,且无
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该文将ICA69编码基因重组到表达型质粒pGEX-2T中,经过酶切鉴定,筛选出阳性重组子,通过序列分析证实ICA69表达型重组质粒5端多克隆位点与重组片段衔接处的核苷酸顺序正确,且无读码框架改变.在上述工作的基础上,将用pGEX载体系统体外构建的重组表达型质粒p2T-ICA69转化入原核细胞宿主菌E.coli中,以IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)诱导表达,表达的蛋白产物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳推算分子量,并根据激光密度扫描估计表达效率,确定最优宿主菌株与诱导表达条件.最后,利用间接ELISA法检测正常人和Ⅰ型糖尿病病人血清,以确定表达产物的免疫原性;同时初步检测了病人血清中抗ICA69自身抗性,为今后的表达产物在糖尿病临床诊断中的应用提供了有利条件.
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