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背景及目的
器官移植己成为许多实质器官终末期疾病唯一有效的治疗方法，但仍面临着许多挑战。尽管免疫抑制剂的发展日新月异，器官移植的排斥反应仍然是导致移植失败的主要原因。近年的研究发现，免疫记忆可能是导致免疫抑制剂失效的元凶。目前，移植受体体内因反复输血、多次妊娠、微生物感染、长期血液透析和再次移植产生的预存抗体，因记忆性体液免疫可导致急性排斥反应已成为共识。然而，现阶段临床主流免疫抑制剂几乎都是针对抑制初始T细胞的激活和归巢功能，而记忆性T细胞的激活和归巢途径与初始T细胞明显不同。研究证实，在大剂量应用免疫抑制剂的患者体内，仍有大量记忆性T细胞的存在，这就表明免疫抑制剂并不能抑制同种反应性记忆性T细胞的形成。本研究在小鼠同种异系心脏移植模型的基础上，探讨记忆性CD4+T细胞在免疫抑制剂作用下是否仍能导致急性排斥反应，对提高器官移植质量、增加器官移植患者生存几率具有重要意义。
方法
1．皮肤预致敏模型的建立以近交系BALB/C小鼠为供体，近交系C57BL/6小鼠为受体，进行背部皮肤移植。
2．CD4+记忆性T细胞的分离、纯化及表型鉴定皮肤移植8周后，取受体鼠脾脏，制备脾淋巴细胞悬液。用小鼠CD4+记忆性T细胞磁珠分选试剂盒分离出CD4+记忆性T细胞并进行活性鉴定。加入相应抗体后，用流式细胞仪鉴定其表型。以同样的方法，用小鼠未致敏CD4+T细胞免疫磁珠分选试剂盒重复上述步骤，获得未致敏CD4+T细胞。
3．过继性记忆性心脏移植模型将预致敏C57BL/6小鼠脾脏Tm细胞过继转移给正常C57BL/6小鼠，然后以BALB/c小鼠为供体，采用套管法进行颈部异位心脏移植。
4．检测指标
移植物生存期观察：术后每日触摸颈部搏动情况判断移植物是否存活，搏动停止即判断为完全排斥。
移植心脏的病理学检测：取移植物心底部分，制做冰冻切片并行H&E染色，光镜下观察。器官排斥程度参照ISHLT标准进行判定，并进行组间的比较结果1．流式细胞仪鉴定磁珠分选法分离出的CD4+记忆性T细胞浓度大于92％，可用于细胞输注2．皮肤移植模型制作成功率95%，心脏移植模型制作成功率82.5%。心脏移植实验组与对照组供心中位存活时间分别为7d与＞30d。两者差异具有统计学意义(P＜0.01)。
3．冰冻切片示实验组心肌细胞变性坏死，血管周围及间质中有大量炎性细胞浸润；对照组心肌间质中有少量炎性细胞浸润。按ISHLT标准分级比较后经秩和检验结果显示实验组的移植物急性排斥反应程度高于对照组。
结论
本实验证实预先输注CD4+记忆性T细胞的小鼠，其供心存活时间明显短于对照组，且供心急性排斥反应级别与对照组相比较高，说明CD4+记忆性T细胞在免疫抑制剂作用下仍能导致急性排斥反应，导致移植物坏死。分析其原因可能为所选用的免疫抑制剂无法抑制CD4+记忆性T细胞的激活。而CD4+记忆性T细胞的活化途径究竟如何绕开所选免疫抑制剂的作用，及何种免疫抑制药物能够抑制记忆性CD4+T细胞的活化等，还有待进一步研究。