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背景：
目前,急性心肌梗死的治疗主要包括药物治疗、介入治疗和外科手术,尤其介入治疗和外科手术极大地改善了患者症状,提高了生活质量。但是仍有部分患者由于血管弥漫性病变、手术风险太大或其它原因而未能行血运重建治疗,尽管给予最大限度的药物治疗,仍有症状或心肌缺血。因此,必须寻找其他血运重建方法以减轻心绞痛症状和改善心肌缺血,挽救濒危心肌。于是,人为地刺激血管新生的方法就应运而生。血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)参与急性心肌梗死(AMI)的血管重建,能促进心肌梗死后新生血管和侧支循环的形成；EPCs还可以参与心肌的生成,它有能力转化为具有肌纤维表型的细胞如心肌细胞[1]或平滑肌细胞(SMCs);EPCs还能促进血管损伤后内皮的修复、减少内膜增生的过程,在AMI的临床治疗中有潜在的治疗价值。
Peroxisome proliferator-activated receptor(PPAR)γ受体激动剂除了改善胰岛素的敏感性来改善血糖控制并改善其他心血管疾病的危险因子如血脂、血压、炎症标志物、内皮功能紊乱和纤溶状态异常以外,使小鼠骨髓来源的血管形成祖细胞向内皮细胞分化,并抑制向平滑肌细胞的分化,延缓了血管形成术后的再狭窄[2,3]。此外,还可以加速EPCs的动员、分化和增殖,升高外周血中EPCs的水平。其对心血管系统的作用越来越受到人们的关注,成为近年研究的热点。
本研究利用PPARγ受体激动剂罗格列酮(rosiglitazone)治疗急性心肌梗死合并糖尿病的患者,观察罗格列酮对AMI患者外周血EPCs数量和粘附、迁移与增殖功能的影响。
方法：
(1)选择首发的急性心肌梗死合并糖尿病患者15例,在给予抗凝、扩冠、降脂等常规治疗上,加予罗格列酮8mg/d治疗,连续服药三天。在服药前、服药后第一、二、三天各采血一次,每次采外周血约20ml,EDTA-Na2抗凝,进行检测。
(2)EPCs的鉴定采用激光共聚焦显微镜观察,DiI标记乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)和FITC标记荆豆凝集素I(FITC-UEA-I)双染色阳性细胞为正在分化的EPCs。
(3)利用细胞粘附能力测定评价外周血EPCs的粘附能力。
(4)利用改良Boyden小室测定外周血EPCs的迁移能力。
(5)采用体外血管生成试剂盒检测EPCs血管生成能力。
(6)利用MTT比色实验评价外周血EPCs的增殖能力。
结果：
(1)EPCs的鉴定：分离获得的外周血单个细胞培养7天后,细胞呈梭形的内皮排列,用DiI标记乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)和FITC标记荆豆凝集素I(FITC-UEA-I)对贴壁细胞行荧光化学染色后采用激光共聚焦显微镜下观察,DiI-acLDL染色阳性呈红色,FITC-UEA-I染色阳性呈绿色,超过80％的细胞双染色阳性。
(2)罗格列酮对AMI患者的EPCs数量的影响。服药第一天后,患者的EPCs数量开始增加。连续服药三天,每天采外周血进行培养,测得服药前EPCs的数量为：331.93±60.95(个/视野),服药后第一、二、三天EPCs的数量分别为(个/视野)：341.86±58.82、350.00±60.14、365.06±59.58。服药后第一天的数值与服药前比较,有显著差异(P<0.05)。服药后第二天与第一天比较,及第三天与第二天比较,均有显著性差异。而第三天与服药前比较在统计学上有显著性差异(P<0.001)。
(3)罗格列酮对AMI患者的EPCs粘附能力的作用。服药后第一、二、三天均采血一次,培养后检测贴壁的EPCs的数量。服药前EPCs的数量为：[72.00±7.13(个/视野),服药后第一、二、三天EPCs的数量分别为(个/视野)：173.46±6.86、175.27±6.93、177.13±6.75。AMI患者第一天服用罗格列酮治疗后,EPCs的黏附能力开始增加,与服药前对比,有显著性差异(P<0.05),随着服药时间延长,其黏附能力略有增加,服药三天,其黏附能力与服药前对比有显著性差异(P<0.001)。
(4)罗格列酮对AMI患者的EPCs迁移能力的作用。服药后第一、二、三天均采血一次,培养后检测迁移到底层的EPCs的数量。服药前EPCs的数量为：3 15.07±16.02(个/视野),服药后第一、二、三天EPCs的数量分别为(个/视野)：317.20±16.44、321.4±16.22、326.67±14.81。AMI患者第一天服用罗格列酮治疗后,EPCs的迁移能力开始增加,但是与服药前对比,在统计学上无显著差异(P>0.05)。随着服药时间延长,其迁移能力逐渐增加,服药第二、三天,其黏附能力与服药前对比均有显著性差异(P<0.001)。
(5)罗格列酮对AMI患者的EPCs体外血管生成能力的作用。服药后第一、二、三天均采血一次,培养后检测得数值。服药前EPCs的数量为：33.47±3.37(个/视野),服药后第一、二、三天EPCs的数量分别为(个/视野)：33.93±3.26、34.93±3.06、36.67±2.97。AMI患者第一天服用罗格列酮治疗后,EPCs的体外血管生成能力开始增加,但是与服药前对比,在统计学上无显著差异(p>0.05)。随着服药时间延长,其体外血管生成能力逐渐增加,至服药第三天,其体外血管生成能力与服药前对比有显著性差异(P<0.001)。
(6)罗格列酮对AMI患者的EPCs增殖能力的作用。服药后第一、二、三天均采血一次,培养后检测得MTT值。服药前MTT值为：0.343±0.029,服药后第一、二、三天MTT值分别为：0.355±0.029、0.367±0.025、0.374±0.025。AMI患者第一天服用罗格列酮治疗后,EPCs的增殖能力开始增加,但是与服药前对比,在统计学上无显著性差异(P>0.05)。随着服药时间延长,其增殖能力逐渐增加,服药第二、三天,其增殖能力与服药前对比有显著性差异(P<0.001)。但服药第二天与第三天后检测EPCs的增殖能力,两者之间无统计学意义(P>0.05)。
结论:PPARγ激动剂罗格列酮能增加AMI患者外周血中的EPCs的数量,并改善了EPCs的黏附、迁移、体外血管生成与增殖功能。