论文部分内容阅读
第一章间充质干细胞及糖尿病足小鼠模型的制备和检测目的本研究通过脐带的采集、培养,制备出高纯度的脐带间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)。通过db/db小鼠单侧肢体股动脉及其分支结扎构建糖尿病足小鼠模型。并对制备的间充质干细胞和糖尿病足模型小鼠进行检测。方法分离采集脐带华通胶,通过组织块法培养人脐带间充质干细胞。通过24小时细胞存活率、细胞表面标志物等进行检测。通过结扎db/db小鼠单侧肢体股动脉及其分支构建糖尿病足小鼠模型,通过临床表现、随机血糖、肢体温度等进行模型检测。结果通过脐带华通胶成功培养出间充质干细胞。24h细胞存活率91.2±0.86%,大于 90%。细胞表面标志:CD73(91.63%)、CD90(99.71%),CD105(99.94%)阳性有较高比例,均超过90%,同时CD34表达较低(0.64%)。细胞存活率和细胞表面标志均符合间充质干细胞要求。通过结扎db/db糖尿病小鼠游离单侧股动脉及其分支成功构建糖尿病足模型小鼠30只。测PBS组和MSC组随机血糖分别为32.72±0.70mmol/L及32.78±0.98mmol/L,患侧肢体与对侧肢体比值分别为32.84±2.28%及31.44±1.21%。符合糖尿病足模型建模要求。结论应用组织块法培养可成功制备人脐带间充质干细胞。结扎db/db糖尿病小鼠股动脉及其分支可成功构建糖尿病足模型小鼠。第二章脐带间充质干细胞治疗糖尿病足小鼠模型目的本研究旨在通过培养的脐带间充质干细胞移植入糖尿病足模型小鼠患肢中,评估间充质干细胞对糖尿病足模型小鼠的治疗效果。方法将构建好的30只糖尿病足模型小鼠随机分为PBS组(15只)和MSC组(15只)。MSC组在患肢处肌注移植干细胞为1×106,共1mL。PBS组同方法体温变化、血糖变化、体重变化。免疫荧光染色观察毛细血管密度。HE染色法观察肌肉组织变化。Western blotting检测Bax、Bcl-2及VEGF在细胞移植后的变化。结果干预后MSC组血糖与PBS组相比明显下降(P<0.05),干预后两组体重均有所下降(P>0.05)。干预后MSC组患肢肢体温度较PBS组明显上升(P<0.05)。免疫荧光染色血管密度比较结果显示干预后7天、14天及21天血管密度MSC组均比PBS组高(P<0.05)。HE染色结果显示干预后PBS组组织明显萎缩,并有大量细胞不同程度变性甚至凋亡。而MSC组肌肉组织形态规则完整,并可见较多新生毛细血管形成。Western blot法检测Bax、Bcl-2及VEGF结果显示MSC组 VEGF、Bcl-2、Bax 有统计学差异(P<0.05)。结论间充质干细胞移植糖尿病足模型小鼠可显著改善患肢肢体温度、增加毛细血管密度、促进肌肉组织再生,VEGF、Bcl-2升高、Bax降低提示其可能在抑制细胞凋亡、促进细胞再生方面中发挥重要作用。