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[目的]
克隆银屑病的易感基因HLA-Cw*0602，并制备携带该基因的转基因小鼠，以期获得具有人类银屑病样病理变化特征且能稳定遗传的转基因小鼠模型，为银屑病发病机理的探索提供研究基础，为治疗银屑病的药物研究提供有效的动物模型。
[方法]
收集银屑病患者血液标本，提取全血基因组DNA。用PCR-SSP方法筛选含有HLA-Cw*0602等位基因的阳性基因组DNA，并以之为模板，用PCR法扩增人类HLA-Cw*0602基因。将扩增产物克隆至pMD19-T载体上构建重组质粒pMD19-T/HLA-Cw*0602并将该质粒转化至大肠杆菌DH5α扩增培养。测序鉴定正确后，将该质粒用Nde I单酶切或EcoR I、HindlII双酶切处理，可获得两种不同类型的携带HLA-Cw*0602基因的注射用DNA片段。将所制备片段回收纯化后稀释至8ng/μl用于显微注射。使用显微注射仪将携带HLA-Cw*0602基因的DNA片段注入FVB小鼠受精卵原核内，注射后挑选形态完好的受精卵移植至假孕ICR雌鼠体内继续发育。小鼠出生后用PCR法筛选阳性转基因小鼠。将阳性首建鼠与野生型小鼠进行交配繁殖，建立新的小鼠品系，并用PCR方法筛选阳性子代鼠，为后续试验做准备。
[结果]
从银屑病人血液基因组标本中成功筛选出携带人类银屑病易感基因HLA-Cw*0602的样本，并通过PCR技术扩增得到包含了HLA-Cw*0602基因的天然启动子、所有内含子、所有外显子及下游polyA的基因片段。构建了适合显微操作的携带HLA-Cw*0602基因的DNA片段，并将该片段以显微注射法导入小鼠的受精卵原核内。
本次试验共对500枚FVB小鼠受精卵进行显微注射，注射后挑选出320枚形态正常的卵细胞进行移植。共移植至14只ICR代孕鼠体内，其中10只分娩，共获得新生小鼠59只。经PCR筛选获得阳性转基因小鼠8只。携带银屑病易感基因HLA-Cw*0602的转基因小鼠模型初步构建成功。
[结论]
从银屑病患者的血液基因组标本中筛选出含HLA-Cw*0602基因的DNA样本，并成功克隆该银屑病易感基因；制备了可用于显微注射的含该基因的DNA片段；初步构建了携带人类银屑病易感基因HLA-Cw*0602的转基因小鼠，为后续研究奠定了基础。