β肾上腺素受体基因的克隆及表达

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本研究从大仓鼠的肺细胞组织总RNA中,用特异性引物,通过RT-PCR的方法扩增得到β2AR基因全序列。测序结果表明,该基因与NCBI上报道的5种动物的β2AR基因具有87.8%~96%的同源性,表明该基因属于β2AR家族成员,大仓鼠β2AR基因序列长度为1254bp,编码417个氨基酸。   本研究将β2AR全长基因(β2AR)、N端和(或)C端截短的4个不同长度的片段(β2AR62,β2AR62-319,β2AR62-264,β2AR62-180)及C端通过PCR构建有6His标签的两个长度的片段(β2AR-6His,β2AR62-6His)构建到表达载体pGEX-4T-1上,转化大肠杆菌OrigamiTMB后,经IPTG诱导与SDS-PAGE检测发现pGEX-4T-1-β2AR62-6His融合蛋白在体外能够表达。蛋白质印迹实验进一步确认了受体蛋白在体外的表达。   
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