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第一部分Cleaved Caspase3,ROCK2和VEGF在宫颈癌中的表达及临床意义 目的:探讨ROCK2、血管内皮生长因子(VEGF)和Cleaved Caspase3在宫颈癌病变组织和血液中的表达及临床意义。 方法:在46例慢性宫颈炎和52例宫颈鳞癌组织中,应用免疫组织化学法、荧光实时定量PCR和Western blotting法分别检测的上述指标表达情况。 结果:在不同组织中的ROCK2、VEGF和Cleaved Caspase3的相对表达量均不同,慢性宫颈炎组的ROCK2和VEGF基因和蛋白表达量极显著低于宫颈癌组(P<0.01)。Cleaved Caspase3基因和蛋白表达呈相反趋势。 结论:在宫颈鳞状细胞癌中ROCK2和VEGF含量为高表达,但Cleaved Caspase3含量极低,三者均参与了宫颈癌的发生变化,因此其联合检测有助于判断患者预后。 第二部分 siRNA介导的ROCK2基因沉默对人宫颈癌HeLa细胞生物学行为的影响 目的: siRNA靶向干扰宫颈癌细胞ROCK2基因表达对其生物学行为的影响 方法:合成了ROCK2基因序列的siRNA表达载体,利用脂质体法转染入人 Hela细胞;用实时荧光PCR及Western Blot方法分析了ROCK2 siRNA对宫颈癌细胞ROCK2基因表达的抑制作用;MTT法分析干扰前后宫颈癌细胞增殖活性,用Transwell法检测干扰前后宫颈癌细胞体外迁移能力的改变,流式细胞术检测干扰前后宫颈癌细胞体外凋亡率的改变。 结果:ROCK2-siRNA可抑制HeLa ROCK2 mRNA和蛋白的表达,抑制率分别达到72.7和81.4%%。ROCK2-siRNA作用72h后,Hela细胞增殖开始能力减弱;ROCK2-siRNA作用后,HeLa细胞迁移能力均显著低于对照组(P<0.05);但凋亡率均显著高于对照组(P<0.05); 结论:抑制 ROCK2的表达后,HeLa细胞的增殖速度和迁移细胞数开始减慢,但是细胞的凋亡率明显上升,说明ROCK2对宫颈癌细胞增殖、迁移能力和凋亡率起一定的作用。