金钗石斛质量控制方法研究

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中药石斛来源于兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium Sw.)多种植物的茎,应用历史悠久,是我国常用名贵中药材。近年来,对石斛的研究主要集中在化学成分研究及快速繁殖等方面,而对其质量控制方面研究相对较少。2005版中国药典中石斛药材的质量标准中仅有简单的性状和茎横切面的显微鉴别,没有以有效成分含量、药材的内在质量评价药材的真伪优劣,阻碍了石斛的合理应用和发展。本文以贵州赤水金钗石斛仿野生种植基地的金钗石斛为研究对象,对其质量控制方法及影响其质量的因素进行了研究。具体研究内容和结果如下:第一部分,文献综述。对石斛属植物的化学成分,药理作用及质量控制方面国内外研究的现状进行了综述。共引用文献86篇。第二部分,化学对照品(石斛碱)的研究。金钗石斛药材用乙醇提取,然后经酸碱处理得到总生物碱部分。总生物碱部分经硅胶柱层析,再经酸碱处理,多次硅胶柱层析分离得到石斛碱。采用波谱技术并结合其理化性质鉴定了其结构。石斛碱为金钗石斛中具有专属性且含量相对较高的成分,确定其为金钗石斛药材的对照品,HPLC测定其纯度大于98%。研究并起草了金钗石斛化学对照品的质量标准(草案)。第三部分,金钗石斛质量标准的研究。总生物碱含量测定方法研究:氨水浸润,氯仿加热回流提取总生物碱。以石斛碱为对照品,溴甲酚绿染色,采用分光光度法在410.0nm波长处测定总生物碱含量并进行了相应的方法学考察。在石斛碱浓度在1.29~6.45μg/m范围内,总生物碱浓度与其吸收度呈良好的线性关系(r=0.9982,n=6),回归方程为A=11.032C+0.012。平均回收率为97.77%,稳定性,重复性均良好,表明该方法对金钗石斛中总生物碱的测定准确,可行,可用于金钗石斛的质量控制。总多糖的含量测定方法研究:以多糖含量为指标,以正交实验法确定了金钗石斛多糖的最佳提取工艺。最佳工艺为:取金钗石斛药材粉末(过60目筛),加水100mL,加热回流提取三次,每次1h。以葡萄糖为对照品,苯酚-硫酸显色,采用分光光度法在487.0nm处测定多糖含量并进行了相应的方法学考察。在葡萄糖浓度在0.005145~0.05145mg/mL范围内,总多糖浓度与其吸收度呈良好的线性关系(r=0.9991,n=6),回归方程为A=13.752C-0.0062。平均回收率为95.35%,稳定性,重复性均良好,表明该方法对金钗石斛中总多糖测定准确,可行,可用于金钗石斛的质量控制。以总生物碱和多糖为指标,比较分析了基地内不同生长环境金钗石斛在质量方面的差异。测定结果表明,光照对金钗石斛要药部位多糖类成分的积累影响显著,对生物碱类成分的积累影响不明显。在上述工作的基础上拟定了仿野生栽培的金钗石斛的质量标准。第四部分,金钗石斛采收期和种质的研究。测定了不同采收期的金钗石斛药材总生物碱和多糖含量,结果表明:金钗石斛药用部位中多糖及总生物碱的含量各月份之间有一定变化。从全年来看,总生物碱类成分的累积出现两个高峰阶段,3月和9到12月间。多糖类成分累积的高峰期出现在10月和11月。综合多糖和生物碱的含量变化以及生物量的因素,并结合考虑传统的采收期,最佳采收期宜在10月到11月之间较为适宜。不同年限的样品测定结果为二年生样品多糖及总生物碱含量较高。测定了不同变异类型金钗石斛药材的总生物碱和多糖含量。竹叶兰和蟹爪兰多糖含量比较高,分别为13.53%和11.82%,。蟹爪兰,鱼肚兰,七寸兰中总生物碱含量均较高分别为0.28%,0.27%,0.28%。对四种石斛进行了红外光谱研究。
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