论文部分内容阅读
目的：PD-1/PD-L1(Programmed death-1,PD-1;Programmed death ligand-1,PD-L1)负性信号通过抑制效应性T细胞的活化与增殖，并导致T细胞免疫耗竭，可参与肿瘤的发生发展和慢性感染性疾病的进展。但PD-L1在乙肝患者外周血相关免疫细胞亚群上的表达特性及其与病程变化的相关性尚不十分清楚。本研究旨在通过检测由乙肝病毒（Hepatitis B virus，HBV）感染导致的慢性乙肝及肝硬化与肝患者外周血单核细胞和B细胞表面PD-L1的表达特性，分析其与乙肝患者临床病症的相关性，并结合业已阐明的PD-1在乙肝患者外周血CD4+和CD8+T细胞表面的表达特性，来探讨PD-1/PD-L1负性信号在乙肝患者疾病进展中的动态变化及其临床意义。 方法：采用多色荧光标记和流式细胞术检测了健康志愿者(Healthy control，HC)、慢性乙肝（Chronic hepatitis B virus infection，CHB）及肝硬化(Liver cirrhosis，LC)与肝细胞（Hepatocellular carcinoma，HCC）患者外周血CD4+、CD8+、CD14+、CD19+免疫细胞亚群的分布和CD14+单核细胞、CD19+B细胞表面PD-L1的表达;采用酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测乙型肝炎血清学指标;采用荧光定量PCR法检测HBV DNA，检测结果以＞5×102 copies/ml判断为阳性;采用罗氏全自动生化分析仪检测肝功能指标谷丙转氨酶(Alanineaminotransaminase，ALT)和谷草转氨酶（Aspartate aminotransferase，AST）。数据统计及相关性分析采用GraphPad Prism6.0软件。 结果：将乙肝病例分为慢性乙肝组(CHB)和乙肝进展组(LC+HCC)。 (1)乙肝患者各免疫细胞亚群的变化情况。与HC组相比，CD3+CD4+/CD3+百分比在CHB和LC+HCC组患者外周血中均显著下降，而CD3+CD8+/CD3+、CD14+PD-L1+/CD14+、CD19+PD-L1+/CD19+百分比、CD4/CD8比值在两病例组中则均呈显著上升;CD14+/CD45+仅在LC+HCC病例组中上调，而在CHB组中无显著性上升;淋巴细胞中CD3+、CD19+的百分比在两病例组中均无显著性变化;此外，上述指标在两病例组中均无显著性差异。 (2)乙肝患者CD14+PD-L1+/CD14+、CD19+PD-L1+/CD19+百分比与临床病症的相关性。进一步的分析结果表明，CHB组中CD14+PD-L1+/CD14+百分比与HBV病毒载量、肝功能指标ALT和AST均呈显著性负相关，而CD19+PD-L1+/CD19+百分比与肝功能指标AST呈正相关，与HBV病毒载量则无相关性;在LC+HCC病例组中，CD14+PD-L1+/CD14+百分比与HBV病毒载量呈正相关，与肝功能指标间无相关性，而CD19+PD-L1+/CD19+百分比与肝功能指标ALT和AST均呈正相关，与HBV病毒载量则无相关性。 (3)淋巴细胞亚群与临床病症的相关性。两病例组中仅发现淋巴细胞中CD3+的百分比与ALT呈一定程度的负相关，而与AST、HBV病毒载量无相关性;此外，CD3+CD4+/CD3+、CD3+CD8+/CD3+、淋巴细胞中CD19+的百分比及CD4/CD8比值与HBV病毒载量、肝功能指标ALT、AST间均无显著相关性。 结论：与HC组相比，乙肝患者外周血相关免疫细胞亚群及PD-L1在相关细胞亚群上的表达发生了明显变化，为乙肝病程的进展提供了有价值的免疫学参考指标，并为通过阻断PD-1/PD-L1负性信号对乙肝进行免疫治疗提供了初步的理论依据。