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背景
主动脉夹层(aortic dissection,AD)是主动脉腔内的血液从内膜撕裂后进入中层并沿着主动脉长轴纵向剥离扩张的心血管疾病。血管重塑和内皮退行性变是其发病机制之一，而本病的共同病理改变是平滑肌细胞缺失、弹性纤维断裂和胶原降解等。主动脉夹层患者血浆中的血管紧张素Ⅱ水平升高。以往学者使用AngⅡ灌注小鼠，组织学发现其主动脉内膜明显增厚，中膜变薄呈退行性改变，进而形成主动脉夹层，这提示AngⅡ可能与主动脉夹层的形成有关，但具体的机理有待研究。近年来有研究发现了AngⅡ可以诱导内皮发生间质化，内皮间质化(EndMT)最初是在胚胎心脏和瓣膜发育过程中观察到的现象，随后有研究发现在二叶主动脉瓣的主动脉夹层患者升主动脉中内皮也发生了EndMT。在这些研究的基础上，我们猜想AngⅡ诱导内皮细胞发生间质化可能是主动脉夹层发生发展的机制之一。EndMT的发生其实也是一种慢性炎症的过程，已发现炎症细胞因子、肿瘤坏死因子(TNF-α)等可以通过NF-κB或TGF-β途径诱导内皮发生EndMT，因此AngⅡ诱导EndMT也是一种慢性炎症反应。白介素-37(IL-37)是一个新型抗炎因子，以往研究发现巨噬细胞或上皮细胞中IL-37的表达可以几乎完全抑制炎症细胞因子的产生，并且随着人血细胞中的IL-37基因沉默，这些细胞因子相应地增加。而在我们课题组的另一项实验中证实IL-37可以抑制肽聚糖(PGN)刺激后人冠状动脉内皮细胞NF-κB的活化，并降低内皮细胞ICAM-1生成。如果可以在研究中证实其抑制主动脉夹层病理状态下内皮细胞间质化所引起的炎症反应，这也许可为主动脉夹层的防治提供一个新的研究思路。
目的
1.探讨血管紧张素Ⅱ诱导主动脉夹层患者内皮细胞发生间质转化的作用。
2.探讨IL-37b对血管紧张素Ⅱ所诱导的主动脉夹层患者内皮细胞间质化的影响。
方法
1.将手术中取得的人主动脉组织剥离出内皮层，用I型胶原酶加胰酶共同消化分离出人主动脉内皮细胞，利用相差显微镜观察细胞的生长状态，流式细胞法鉴定及检测细胞的纯度。
2.用不同浓度的血管紧张素Ⅱ(0、10-7、10-6、10-5、10-4mol/L)作用于主动脉内皮细胞，探索内皮间质化改变最明显的药物浓度(10-4mol/L)。
3.将购于公司的正常人主动脉内皮细胞和分离自主动脉夹层患者的主动脉内皮细胞各分为三组，分别为：空白组，血管紧张素Ⅱ处理组(10-4mol/LAngⅡ)，IL-37b干预组(1ng/mlIL-37b+10-4mol/LAngⅡ)。以上各分组均培养48小时。48小时后提取各分组细胞蛋白，利用westernblot法检测细胞中波形蛋白(Vimentin)、VE-钙粘蛋白(VE-cadherin )、CD31、α-SMA蛋白的表达。
结果
(1)钝性分离出人主动脉内皮层，I型胶原酶和胰酶相结合的酶消化法是一个较为成功的人主动脉内皮细胞的获取方法。
(2)血管紧张素Ⅱ刺激48小时后可诱导主动脉夹层患者主动脉内皮细胞发生内皮间质化改变。
(3)IL-37对血管紧张素Ⅱ诱导的病变主动脉内皮细胞间质化改变有抑制作用。
结论
血管紧张素Ⅱ可以诱导主动脉夹层患者发生内皮细胞向间质化转变。IL-37对这种间质化改变有一定的抑制作用。
主动脉夹层(aortic dissection,AD)是主动脉腔内的血液从内膜撕裂后进入中层并沿着主动脉长轴纵向剥离扩张的心血管疾病。血管重塑和内皮退行性变是其发病机制之一，而本病的共同病理改变是平滑肌细胞缺失、弹性纤维断裂和胶原降解等。主动脉夹层患者血浆中的血管紧张素Ⅱ水平升高。以往学者使用AngⅡ灌注小鼠，组织学发现其主动脉内膜明显增厚，中膜变薄呈退行性改变，进而形成主动脉夹层，这提示AngⅡ可能与主动脉夹层的形成有关，但具体的机理有待研究。近年来有研究发现了AngⅡ可以诱导内皮发生间质化，内皮间质化(EndMT)最初是在胚胎心脏和瓣膜发育过程中观察到的现象，随后有研究发现在二叶主动脉瓣的主动脉夹层患者升主动脉中内皮也发生了EndMT。在这些研究的基础上，我们猜想AngⅡ诱导内皮细胞发生间质化可能是主动脉夹层发生发展的机制之一。EndMT的发生其实也是一种慢性炎症的过程，已发现炎症细胞因子、肿瘤坏死因子(TNF-α)等可以通过NF-κB或TGF-β途径诱导内皮发生EndMT，因此AngⅡ诱导EndMT也是一种慢性炎症反应。白介素-37(IL-37)是一个新型抗炎因子，以往研究发现巨噬细胞或上皮细胞中IL-37的表达可以几乎完全抑制炎症细胞因子的产生，并且随着人血细胞中的IL-37基因沉默，这些细胞因子相应地增加。而在我们课题组的另一项实验中证实IL-37可以抑制肽聚糖(PGN)刺激后人冠状动脉内皮细胞NF-κB的活化，并降低内皮细胞ICAM-1生成。如果可以在研究中证实其抑制主动脉夹层病理状态下内皮细胞间质化所引起的炎症反应，这也许可为主动脉夹层的防治提供一个新的研究思路。
目的
1.探讨血管紧张素Ⅱ诱导主动脉夹层患者内皮细胞发生间质转化的作用。
2.探讨IL-37b对血管紧张素Ⅱ所诱导的主动脉夹层患者内皮细胞间质化的影响。
方法
1.将手术中取得的人主动脉组织剥离出内皮层，用I型胶原酶加胰酶共同消化分离出人主动脉内皮细胞，利用相差显微镜观察细胞的生长状态，流式细胞法鉴定及检测细胞的纯度。
2.用不同浓度的血管紧张素Ⅱ(0、10-7、10-6、10-5、10-4mol/L)作用于主动脉内皮细胞，探索内皮间质化改变最明显的药物浓度(10-4mol/L)。
3.将购于公司的正常人主动脉内皮细胞和分离自主动脉夹层患者的主动脉内皮细胞各分为三组，分别为：空白组，血管紧张素Ⅱ处理组(10-4mol/LAngⅡ)，IL-37b干预组(1ng/mlIL-37b+10-4mol/LAngⅡ)。以上各分组均培养48小时。48小时后提取各分组细胞蛋白，利用westernblot法检测细胞中波形蛋白(Vimentin)、VE-钙粘蛋白(VE-cadherin )、CD31、α-SMA蛋白的表达。
结果
(1)钝性分离出人主动脉内皮层，I型胶原酶和胰酶相结合的酶消化法是一个较为成功的人主动脉内皮细胞的获取方法。
(2)血管紧张素Ⅱ刺激48小时后可诱导主动脉夹层患者主动脉内皮细胞发生内皮间质化改变。
(3)IL-37对血管紧张素Ⅱ诱导的病变主动脉内皮细胞间质化改变有抑制作用。
结论
血管紧张素Ⅱ可以诱导主动脉夹层患者发生内皮细胞向间质化转变。IL-37对这种间质化改变有一定的抑制作用。