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目的:本实验通过自体移植手术建立子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)大鼠模型,观察EMs大鼠异位内膜形态学及病理学变化,探讨活血利水法对AQP1、2、5的影响,进一步阐述活血利水法治疗子宫内膜异位症的机制,为治疗EMs提供临床思路与理论依据。 方法:1.造模:未交配生育雌性SD大鼠135只,体重180±20g,适应性喂养7天后,观察大鼠阴道脱落细胞情况记录大鼠动情周期,选出有动情周期规律的大鼠123只,随机选出15只作为正常对照组、16只作为假手术组。在第三个动情周期的动情期,将剩余有2个正常动情周期的92只大鼠进行自体移植手术。术后30天二次手术探查造模是否成功。2.分组给药:将造模成功的大鼠75只随机分为模型组、丹莪组,桂高组、桂低组、散结组,各组给药情况如下:正常对照组、模型组、假手术组给予生理盐水灌胃,丹莪组给予丹莪妇康煎膏灌胃,桂高组、桂低组给予桂枝茯苓胶囊高、低剂量混悬液灌胃,散结组给予散结镇痛胶囊混悬液灌胃。3.指标检测:给药4周后,观察异位灶变化后采集异位子宫内膜组织标本,镜下观察子宫内膜的病理形态的改变,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测EMs大鼠异位内膜AQP1、2、5mRNA的表达量。 结果:1.用药组异位灶形态学变化:模型组病灶体积变大,形如囊泡,内含液体,表层为细小新生血管。桂高组异位灶明显萎缩,个别异位病灶消失,仅见残余缝合线的痕迹。桂低组、丹莪组、散结组异位病灶较用药前体积缩小,但桂低组、散结组异位病灶缩小、消失的程度不明显,且个别异位病灶与周围组织粘连,不易分粘。2.镜下各组内膜组织的变化:正常对照组、假手术组上皮细胞结构完整,腺腔呈椭圆形或圆形,间质结构完整、其内可见少许的血管;模型组异位内膜增生明显,腺体增多,腺腔增大明显,腺上皮部分呈复层排列,上皮细胞呈高柱状或立方状;各用药组异位内膜腺体数量减少,上皮细胞萎缩,间质细胞减少,血管数量减少,尤以桂高组异位内膜萎缩最为明显。3.RT-qPCR法检测结果:与正常对照组相比,模型组异位内膜AQP1mRNA表达显著升高(P<0.01),模型组异位内膜AQP2、AQP5mRNA表达显著下降(P<0.01);与模型组相比,桂高组、桂低组、散结组、丹莪组异位内膜AQP1mRNA表达显著下降(P<0.01),桂低组、散结组与桂高组相比,具有统计学意义(P<0.05),丹莪组与桂高组相比,无统计学意义(P>0.05),丹莪组、桂低组、散结组之间无统计学意义(P>0.05)。桂高组、桂低组异位内膜AQP2mRNA表达升高(P<0.01,P<0.05),桂低组、桂高组两者之间无统计学意义(P>0.05),丹莪组、散结组与桂高组相比,具有统计学意义(P<0.05),丹莪组、桂低组、散结组之间无统计学意义(P>0.05)。桂高组及散结组异位内膜AQP5mRNA表达升高(P<0.01,P<0.05),桂低组、散结组、丹莪组与桂高组相比,无统计学意义(P>0.05),桂低组、散结组、丹莪组之间无统计学意义(P>0.05)。 结论:“活血利水法”代表方桂枝茯苓胶囊可能是通过调节AQP1、AQP2、AQP5在EMs异位内膜中mRNA的表达从而达到治疗EMs的作用,以期丰富“血不利则为水”的内涵。