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苹果是我国第一大栽培果树,在我国农业经济发展过程中占有重要的地位。但苹果病毒病严重制约着苹果的发展,减缓果树生长,降低果实产量及果实品质。目前,还未发现高效的防治方法。因此,进行无毒化栽培是未来果树生产的方向。‘5D2-36’是本课题组最新选育的重要优系,有望进一步培育成新品种;‘秦月’是最新选育的新品种,为此培育新品种(系)‘秦月’、‘5D2-36’的无病毒苗木具有重要意义。本试验以‘蜜脆’、‘秦月’、‘5D2-36’和‘王林’4个品种(系)为试验材料,在对现有的脱毒体系进行优化的基础上,通过茎尖培养与热处理、超低温、化学药剂等相结合的不同脱毒方式对4个品种(系)进行脱毒试验,以期获得几个品种(系)的无病毒苗木。结果如下:1.通过对砂藏的‘蜜脆’、‘秦月’、‘5D2-36’枝条嫩芽进行无菌处理,成功得到3个品种的无菌外植体。2.通过对4个品种(系)进行继代、生根培养。获得了最佳继代、生根培养基的配方:‘秦月’和‘蜜脆’适宜的继代培养基浓度配比为6-BA 1.0 mg·L-1+IBA 0.03mg·L-1;‘5D2-36’和‘王林’适宜的继代培养基浓度配比则分别为6-BA 0.8 mg·L-1+IBA0.03 mg·L-1和6-BA 0.75 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1。‘秦月’、‘5D2-36’和‘王林’最适宜的生根IBA的浓度为0.5 mg·L-1;‘蜜脆’则为0.7 mg·L-1。3.通过运用RT-PCR法对4个品种(系)潜隐性病毒病进行检测,成功检测出脱毒前组培苗携带病毒的情况,其中‘秦月’、‘5D2-36’、‘蜜脆’和‘王林’均携带ASGV、ACLSV,但不携带ASPV。4.对4个品种(系)进行脱毒试验发现:4个品种(系)剥取茎尖大小约为1.0 mm,热处理茎尖再生率最高,超低温再生率极低,化学处理对茎尖成活有一定的影响,但再生率较超低温高。经热处理(45 d)脱毒后,ACLSV脱毒率为100%;经热处理(35-45d)超低温脱毒后,4个品种(系)的ASGV在66.7-100%之间;经热处理(25 d)与化学处理(20μg·mL-1)结合脱毒后,ASGV和ACLSV脱毒率最高,在70-90%之间。‘蜜脆’的ASGV较其它3个品种难脱除。因此,从脱毒率上考虑,‘秦月’、‘5D2-36’和‘王林’最佳处理组合建议为热处理45 d(ACLSV)+超低温(ASGV);从茎尖再生率上考虑,‘秦月’、‘5D2-36’和‘王林’最佳处理组合建议为热处理35 d(ACLSV)+化学处理20μg·mL-1(ASGV)。‘蜜脆’的最佳处理组合建议均为热处理35 d(ACLSV)+化学处理20μg·mL-1(ASGV)。