【摘 要】
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通过对高效液相色谱仪的改进,构建了新型的在线蛋白二维液相色谱分离装置。经过对该装置的调试和加工,组装成适合蛋白质组学研究的多功能多维自动化液相色谱仪器,也是一个可
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通过对高效液相色谱仪的改进,构建了新型的在线蛋白二维液相色谱分离装置。经过对该装置的调试和加工,组装成适合蛋白质组学研究的多功能多维自动化液相色谱仪器,也是一个可与任何液相色谱仪相匹配的独立的辅助设备,并将其命名为“色谱专家”,在此基础上,初步实现了该仪器装置的在线蛋白单柱二维液相色谱功能。第一章为文献综述:详细介绍了二维及其多维液相色谱法及其仪器的发展状况,分析了目前报道的二维及其多维液相色谱仪器装置的优缺点,提出了改进仪器装置的设想和方案,对自动化的二维及其多维色谱仪器装置做了简要的总结。第二章为实验方法,包括本论文所涉及的所有实验所需的各种仪器和试剂,以及各类酶的活性测定方法、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法及其蛋白含量测定方法。第三章首次构建了一种在线单柱蛋白二维液相色谱分离装置并命名“色谱专家”。“色谱专家”具有收集一维馏分并在线进样到二维中去,在线缓冲溶液交换,收集馏分可以低温4℃保存而且可以高温水浴加热的功能。同时以单柱二维液相色谱法为例对该仪器装置的运行原理做了深入的探讨。利用具有疏水功能机理的弱阳离子交换柱在该仪器上成功实现了对多种标准蛋白的单柱二维液相分离,最后对标准蛋白在该仪器上单柱二维液相分离的质量回收率和活性回收率进行了测试,获得了较好的结果。第四章利用构建的在线蛋白二维液相色谱分离装置,以商品的WCX-HIC双机理柱,分别对牛胰腺中的胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶进行2D-LC-1C分离纯化,经过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和薄层扫描测定,均获得了较高纯度的目标蛋白,对质量回收率和活性回收率进行了测试,也得到了较好的结果。最后对“色谱专家”仪器的未来发展做了展望。
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