应用双向电泳技术寻找乳腺癌标志物

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乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,发病率在逐年增加。在西欧、北美等发达国家,乳腺癌发病率居女性癌瘤的首位。我国虽属低发国家,但大、中城市(特别是沿海城市)比农村及内陆地区发病率高,而且有明显上升的趋势。目前,乳腺癌已成为严重威胁我国女性生命的严重疾病之一。 乳腺癌患者只要及早手术治疗,其生存率是很高的,因此乳腺癌的早期检测显得犹为重要。在乳腺癌的检测中,目前的方法有病人的自我检查、医生触摸、乳房CT及钼钯X射线检查、核磁共振成像(MRI)、超声诊断、细胞学检查等。由于这些方法在检测中所存在的缺陷以及对早期检测的局限性,使得乳腺癌检测的准确性较差。利用乳腺癌标志物检测是根据乳腺癌发生的生理机制进行的直接检测,是近年来乳腺癌诊断的发展趋势。而乳腺癌标志物检测的基础是有准确可靠的标志分子。由此,寻找到乳腺癌早期检测的标志物显得非常重要。目前所使用的标志物有雌激素和孕激素受体、CA15-3、HER-2/neu(c-erbB2)肿瘤蛋白等,由于它们在使用中存在检出率低、假阳性高等问题,仍不能满足乳腺癌诊断的需要。因此,寻找新的乳腺癌早期检测的标志物具有极为重要的意义。 本研究通过对双向电泳中蛋白质样品的制备、蛋白质的水化、胶条的泡涨、胶条的第一向聚焦、胶条的平衡、第二向SDS-PAGE电泳、凝胶的染色、凝胶的图像采集、凝胶中蛋白质差异点的寻找等环节的实验条件进行了摸索,建立起了稳定性好、重复性高的双向电泳实验技术体系。然后应用该技术体系对400多个乳腺癌病人的血清和40个非乳腺癌病人血清进行双向电泳分析,比较乳腺癌病人血清电泳图谱和非乳腺癌人群血清电泳图谱,寻找出了四个乳腺癌病人血清中明显强于非乳腺癌人群的蛋白质位点,将这些蛋白点进行质谱鉴定,确定它们为下列蛋白质:1.HumanComplementComponentC3c;2.CrystalStructureOfTheFxiaCatalyticDomainInComplexWithEcotinm84r;3.HumanIAP-likeprotein2;4.HumanHPprotein,这些蛋白可作为候选的乳腺癌标志蛋白。本研究为进一步寻找新的乳腺癌标志蛋白奠定了基础。 本研究建立了新的功能蛋白筛选的双向电泳——质谱技术体系,这为功能蛋白的筛选以及其它肿瘤标志物的筛选奠定了良好基础。
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