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背景与目的食管癌是一种常见的恶性肿瘤,其发生率和死亡率在我国居第4位。由于早期诊断不易,就诊时70%～80%的患者已经进入临床中晚期。手术治疗曾经被视作食管癌的标准治疗方法,但即使是比较早期的病变,其术后复发率仍较高。目前,食管癌总的5年生存率约30%左右,疗效亟待提高。近年来,随着临床肿瘤学的快速发展,食管癌的综合治疗日渐突出,并已引起业内重视,成为临床研究一大热点。食管癌的内科治疗目前仍停留在细胞毒药物治疗水平上。因此寻找新的分子作用靶点,发现新的靶向治疗药物具有重要的意义。组织因子途径抑制物2(tissue factor pathway inhibitor,TFPI-2)又称胎盘蛋白-5 (placental protein,PP),与TFPI是同系物,是Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制物家族的一个成员,它对包括基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)、胰蛋白酶、纤溶酶在内的多种酶类均有抑制作用,而MMPs参与了细胞外基质的重塑,同时它在纤维蛋白溶解、动脉粥样硬化、伤口愈合及肿瘤细胞的浸润转移和血管新生等生理病理过程中都发挥着重要的作用。最近,TFPI-2基因被认为是一个新的候选抑癌基因,越来越多的研究表明TFPI-2能明显抑制肿瘤中MMPs的活性与功能,通过维持细胞外基质的完整、调控肿瘤细胞的凋亡及调节肿瘤血管生成等机制来控制恶性肿瘤细胞的侵袭和转移。启动子区CpG岛(CpGisland)高甲基化在肿瘤形成机制中的确切作用我们尚不清楚,然而众多证据表明,肿瘤抑癌基因CpG岛异常的甲基化导致基因失活和转录抑制是肿瘤发生的重要机制之一[2-4]。CpG岛的过甲基化是可逆的,通过人为或其他因素干预后,可使相关基因CpG岛去甲基化而恢复其表达,因此去甲基化治疗可能成为TFPI-2表达阴性的食管癌治疗的一条新思路。目前关于TFPI-2基因在食管癌中的表达情况的分析研究尚少,本实验的目的是探讨5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2-deoxycytidine,5-Aza-CdR)干预对食管鳞癌细胞株EC9706生长增殖及TFPI-2基因表达的影响,以探索TFPI-2基因的失活机制,同时寻找食管癌治疗的新靶点。方法选取食管鳞癌细胞株EC9706,并用不同浓度的5-Aza-CdR处理该细胞株。MTT法检测干预前后细胞增长率的变化,FCM法检测干预前后细胞凋亡率的变化,RT-PCR技术干预前后EC9706细胞TFPI-2基因mRNA的表达,免疫组化检测干预前后EC9706细胞TFPI-2蛋白的表达。结果食管鳞癌细胞株EC9706存在TFPI-2基因超甲基化,经5-Aza-CdR处理后,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡率明显提高(P<0.05)；细胞中TFPI-2蛋白表达明显增强,同时mRNA的表达水平也较处理前明显提高(P<0.05)。结论1、TFPI-2抑癌基因的表达沉默与食管癌的发生相关；2、5-Aza-CdR可以抑制食管鳞癌EC9706细胞株的增殖,促进细胞凋亡；3、5-Aza-CdR可能是通过消除TFPI-2抑癌基因的启动子的甲基化状态,使其重新表达而抑制食管癌细胞的增殖,并促进凋亡。