【摘 要】
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miRNA是在转录后水平上调节靶基因表达的小非编码RNA,能够参与很多细胞过程的调控。目前已经发现许多病毒能够编码miRNA,执行与病毒感染相关的功能,比如使病毒逃避宿主的防御
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miRNA是在转录后水平上调节靶基因表达的小非编码RNA,能够参与很多细胞过程的调控。目前已经发现许多病毒能够编码miRNA,执行与病毒感染相关的功能,比如使病毒逃避宿主的防御系统、维持病毒的潜伏感染状态,从而在病毒的生活史中起着重要作用。对虾白斑综合症病毒(WSSV)是一种能够感染大多数甲壳类动物的致死性病原,我们实验室研究发现WSSV能够编码40条不同的miRNA,这些miRNA(例如WSSV-miR211和WSSV-miR212)已经被证实能够参与病毒的感染过程。本文在实验室前期研究的基础上,对WSSV编码的WSSV-miR66和WSSV-miR68在WSSV感染中的作用进行分析。采用Northern Blot检测,结果显示WSSV-miR68在感染了WSSV的日本对虾血细胞中表达。从病毒感染后的6h开始,一直到72h,都能检测到WSSV-miR68的表达。我们通过使用反义寡核苷酸(AMO)抑制WSSV-miR68表达的方法,研究其在病毒感染中的作用。结果表明,用WSSV-miR68特异的AMO注射对虾后,WSSV-miR68的表达受到抑制,抑制效果持续到36h；此时,日本对虾血细胞中的WSSV复制在36h之前受到抑制。在三次注射AMO的条件下,对WSSV复制的抑制仍然只能持续到病毒感染后的36h,抑制时间并没有延长。死亡率分析显示,注射一次AMO和注射两次AMO对WSSV诱导的日本对虾死亡的抑制效果是相似的,在病毒感染后的12h和24h,对虾的死亡率显著降低。通过预测,结果显示WSSV-miR68可与宿主和病毒的靶基因互作。研究表明,WSSV-miR66在病毒感染后的6h至72h都会在日本对虾血细胞中表达。采用WSSV-miR66特异的AMO注射对虾后,WSSV-miR66的表达受到抑制,对WSSV-miR66的抑制可持续到36h；与此同时,日本对虾血细胞中的WSSV复制受到抑制。在病毒感染后24h,抑制WSSV-miR66的表达导致对虾因感染WSSV的死亡率显著降低。预测结果显示,WSSV-miR66可与宿主和病毒的靶基因互作。上述试验结果说明,WSSV编码的WSSV-miR66和WSSV-miR68在病毒感染过程发挥重要作用。
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