苦荬菜功能活性成分发掘与紫茎泽兰根抗菌活性成分研究

来源 :中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:quanruihongjing
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苦荬菜(Ixeris polycephala Cass.)是菊科苦荬菜属一年生草本植物,药食同源,也可作为饲用。紫茎泽兰(Ageratina adenophora)是菊科泽兰属多年生植物,世界性恶性入侵物种,具有抗微生物、杀虫、抗肿瘤、化感等多种活性。苦荬菜和紫茎泽兰作为两种常见的菊科植物,其化学成分复杂多样。本论文为进一步阐明苦荬菜和紫茎泽兰的功能性成分,对其化学成分及其生物活性进行了研究。  苦荬菜中药材经粉碎后用95%乙醇浸提,提取物用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇依次萃取,萃取物经多种柱层析和液相色谱分离,获得40个化合物。采用核磁共振和质谱等光谱技术确定了它们的结构。包括(i)9个倍半萜内酯类:8-hydroxy-3,9-dimethyl-6-methylene-decahydroazulenofuran-2(9bH)-one-7-O-β-D-glucopyranoside(1)、8-desoxyartelin(2)、3-hydro-1(10),3,11(13)-guaiatriene-12,6-olide-2-one(3)、Ixerin Z(4)、11,13α-hihydroixerin Z(5)、Ixerin Z1(6)、Ixerin Z2(7)、9α-hydroxyl-4β,11β,13,15-tetrahydrozaluzanin C(8)、10β,14-dihydroxy-11βH-guai-4(15)-ene-12,6α-olide(9),(ii)9个三萜和甾体类:包括日耳曼醇乙酸酯(10)、stigmast-5-ene-3β-ylformate(11)、20-taraxasten-3β-ol(12)、taraxasteryl palmitate(13)、β-谷甾醇(14)、β-胡萝卜苷(15)、3β-羟基-乌苏-12-烯-11-酮(16)、3β-羟基-齐墩果-12-烯-11-酮(17)、β-香树脂醇乙酯(18),(iii)5个黄酮类:芹菜素(19)、金合欢素(20)、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(21)、木犀草素(22)、金圣草黄素(23),(iv)17个其他类:Octadecane-1,6-diol(24)、phytol(25)、咖啡酸(26)、反式对羟基肉桂酸(27)、香草酸(28)、东莨菪内酯(29)、阿魏酸(30)、3,4-二羟基-苯甲醛(31)、6,7-二羟基香豆素(32)、benzyl-2-O-β-D-glucopyranosyl-2,6-dihydroxybenzoate(33)、对羟基苯甲酸(34)、咖啡酸乙酯(35)、丁香酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(36)、对羟基苯乙酸(37)、邻羟基苯甲酸(38)、对甲氧基苯乙酸(39)、dodecyl(Z)-9-hexadecenoate(40),其中1是新化合物,2、3、4、5、6、7、10、11、12、13、20、24、29、33、36、40共16个为首次从苦荬菜中分离得到。对其主要类型化合物-倍半萜内酯类进行了细胞毒活性测试,化合物1、2、3均有较好的细胞毒活性,尤其化合物1对A549和HCT116具有较好的细胞毒活性,其IC50值分别为6.15和11.18μM。  将95%乙醇浸提后的苦荬菜残渣,在80℃条件下,用蒸馏水(1∶10,M/V)提取3次,每次2h。经醇沉,离心,复溶,透析得到苦荬菜粗多糖。通过DEAE-52纤维素层析柱进一步分离纯化得到一种均一多糖KMCP。利用高效液相色谱法、甲基化、核磁共振光谱、扫描电子显微镜实验对KMCP结构进行了初步的表征。结果表明:KMCP为平均分子量为1.95×106Da的阿拉伯半乳聚糖,主要由阿拉伯糖和半乳糖组成,相对摩尔比分别为28.1%和70.3%。其最有可能结构单元为→4)β-Galp(1→残基和→4,6)-β-Galp(1→残基相连为主链,摩尔比为5∶2;→5)-α-Araf(1→残基与α-Araf(1→5)α-Araf(1→二糖残基为侧链,摩尔比为1∶1,且通过→4,6)-β-Galp(1→残基的O-6连接到主链。同时,采用中性红实验测定巨噬细胞的吞噬活性、Griess试剂法测巨噬细胞分泌NO和脾细胞增殖实验综合评价了KMCP对免疫调节的作用,并探索了其作用机制,结果表明KMCP表现出中等强度的免疫调节活性,通过NF-κB信号转导途径激活巨噬细胞,提高巨噬细胞的吞噬能力,促进巨噬细胞产生NO,还能刺激脾淋巴细胞的增殖。综上所述,KMCP具有提高免疫力的功效,可用于制药或功能性食品的开发利用。  从紫茎泽兰根中分离并鉴定得到14个化合物,其中包括1个新单萜类化合物2α-methoxyl-3β-methyl-6-(aeetyl-O-methyl)-2,3-dihydrobenzofuran(A1),1个新倍半萜类化合物1,6-dihydroxy-1-isopropyl-4,7-dimethyl-3,4-dihydronaphthalen-2(1H)-one(A2),还包括12个已知化合物:3-hydroxymuurola-4,7(11)-dien-8-one(A3),泽兰二酮(A4),9-羰基泽兰酮(A5),2-deoxo-2-(β-D-glucopyanoside)-9-oxoageraphorone(A6),pipelol A(A7),eupatorenone(A8),ent-4(15)-eudesmene-1β,6α-diol(A9),6-hydroxythmol-3-O-β-D-glucopyranoside(A10),6-hydroxythmol-6-O-β-D-glucopyranoside(A11),3-hydroxyestragole-β-D-glucopyranoside(A12),(4R,5S)-4-hydroxy-5-isopropyl-2-methyl-2-cyclohexehone(A13),bomane-2,5-diol-2-O-β-D-glucopyranoside(A14)。其中,A3、A5、A8、A13为首次从紫茎泽兰中发现。化合物A1~A14的抗菌活性实验显示,A1、A4、A8对3种革兰氏阳性菌Staphyloccocus aureus Rosenbach、Bacillus cereus、Bacillus subtilis有较好的活性。
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