论文部分内容阅读
在哺乳动物胚胎发育中干扰素起着非常重要的作用,但是对其作用的分子机制知之甚少。本研究运用mRNA差异显示技术比较了正常的兔植入前胚胎和移核的植入前胚胎的基因表达情况,在147个差异表达的片段中选择了一个在正常胚中各期都有表达,而在移核的囊胚期没有表达的基因片段来做深入的分析。
最初分离到的IFRG的片段大小为292bp,反向Norhtern杂交确定为阳性差异。Northern杂交显示该基因在兔的卵巢中高丰度表达,构建卵巢cDNA文库,通过筛库克隆到一个1823bp的cDNA。又经5-RACE得到了完整的全长的cDNA2794bp(Accession#:AJ584672)。该基因编码一个131个氨基酸的蛋白质。将ORF序列进行NCBI检索发现该基因与小鼠IFRG有很高的同源性(98%),因而我们从兔卵巢中得到的这一基因命名为IFRG(干扰素α应答基因)。
RT-PCR和Western杂交结果表明IFRG在所检测的组织中在核酸和蛋白水平都有表达。卵巢组织原位杂交的结果表明IFRG在成熟卵泡的鞘膜细胞(thecalcell)和粒层细胞(granulosacell)细胞中表达,尤其是在靠近卵母细胞的颗粒细胞层中表达显著,在初级卵泡和次级卵泡中IFRG也是在thecal细胞和granulosa细胞中高度表达。整胚原位杂交表明在囊胚中IFRG主要分布于卵裂球中,而在滋养层细胞中没有表达。通过反义RNA注射1—细胞期胚胎发现注射了106拷贝和103拷贝的反义RNA后,胚胎的卵裂速度明显的加快,体外培养的囊胚率也明显的高。并且注射了106拷贝的胚胎有的停留在2一细胞期而不能继续发育。对于IFRG的功能的深入研究为进一步了解IFRG在植入前胚胎发育中的作用奠定基础,为解释IFRG在克隆胚中表达异常提供更多的证据。
对有关兔植入前胚胎发育相关基因研究的还不是很清楚,我们运用mRNA差异显示技术比较正常各期植入前胚胎,获得了22个差异表达的基因,对其进行了测序和NCBI检索。将其中的四个未知基因提交并获得了登录号。本研究将为鉴定更多的与早期胚胎发育相关的基因及探讨早期胚胎发育的分子机制奠定基础。