一株放线菌抗百合灰霉病活性成分研究

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灰霉病已经成为世界范围内作物生产的主要病害之一。灰霉病的最主要侵害对象为食用葡萄、蔬菜、浆果、观赏性花卉等,给世界农业经济带来了巨大的损失,引起了世界各国对灰霉病防治的重视。在我国,随着果蔬、花卉等经济作物的栽培面积不断的扩大,灰霉病的危害愈加明显,使得灰霉病已成为主要病害,严重影响农产品的产量与品质,威胁农业生产。目前,人们一直努力通过从动植物材料、微生物次生代谢产物中寻找活性化合物、采用化学方法合成新化合物以及与环境兼容性良好的生物防治等各种途径来寻找防治灰霉病的新的有效方法。   本文作者对经前期研究证实具有抗百合灰霉病活性的放线菌菌株进行化学筛选,依据微生物次生代谢产物的薄层层析结果,从而确定研究菌株的代谢产物是否具有化学多样性,是否是值得研究的能合成结构新颖化合物的菌株。在本研究中,作者选取了10株经前期研究证实具有活性的菌株进行TLC筛选,最终确定了化学多样性及活性均较好的菌株YIM32462作为后续研究对象。   经分类鉴定,菌株YIM32462为一株链霉菌,与菌株Streptomyces sannanensis。具有较高的相似性。本文采用三种培养基对菌株YIM32462进行少量发酵,通过其发酵提取物的TLC筛选结果,发现采用301#培养基发酵的粗提物多样性较好,并能排除异黄酮等已知培养基成分的影响;采用301#培养基进行5L发酵,并通过抑菌圈测试确定了活性部位在发酵液上清液的乙酸乙酯萃取液中(即FE部分);通过对菌株YIM32462进行放大发酵并应用现代色谱分离技术进行其发酵产物的分离和纯化,从菌株YIM32462发酵上清液的乙酸乙酯萃取液中最终分离到5个化合物,通过波谱数据,确定了这些化合物的结构。它们分别为环-苯丙-脯氨-二肽,Lj-02是一新化合物,结构可能为3,4-二甲基-5-甲氨基-喹啉-7,8-二酮,邻苯二甲酸丁二酯,邻苯二甲酸二-2-乙基己酯,化合物Ij-05由于量太少,其结构有待确定。但是,这5个化合物并不具有抗百合灰霉病活性,活性化合物最终因发酵物量少而无法得到。
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