【摘 要】
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该研究筛选获得了对番茄灰霉病菌有良好抑制作用的拮抗细菌R26,经初步鉴定为芽孢杆菌.对该菌株抗菌物质产生条件、抗菌物质活性成分分离纯化方法及理化性质测定等进行了系统
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该研究筛选获得了对番茄灰霉病菌有良好抑制作用的拮抗细菌R26,经初步鉴定为芽孢杆菌.对该菌株抗菌物质产生条件、抗菌物质活性成分分离纯化方法及理化性质测定等进行了系统研究.通过采用灰霉病菌菌丝提取物为唯一营养成分制成的培养基(BCM)进行筛选,共筛选到对灰霉病菌有拮抗作用的细菌菌株70株.从分离部位来看,根围是筛选强拈抗菌的主要部位;从各拮抗菌抑菌圈直径及所占比例来看,拮抗菌虽广泛分布于各种微生态环境中,但具有强抗菌效果的拮抗菌所占比例小,仅占2.8％.该试验所选用的R26菌株分离自番茄根围土,经鉴定为芽孢杆菌属.研究结果表明,在1000mL含麦芽糖20 g,牛肉浸膏8 g,酵母浸膏5 g的液体培养基中,最有利于其抗菌物质的产生;当温度为32℃,pH值为7,在250mL三角瓶中装20mL液体培养基,接种量为30%(v/v)时,R26菌株产生的抗菌物质抑菌活性最高.培养液中抗菌物质活性随着培养时间的延长而增加,48h时发酵液的抑菌活性达到最高,随后会稳定一定的时间,而后随着培养时间的延长,抑菌活性又开始逐渐的减小.R26发酵液经过离心除去菌体、50%饱和度的(NH4)2SO4分段盐析、透析除盐、DEAE-52离子交换层析、聚乙二醇2000浓缩后纯化出一种抗菌蛋白,该蛋白经PAGE检测为一条带,经SDS-PAGE检测为两条条带,所以认为该蛋白已经纯化,该蛋白两条带的分子量分别为38080D和36300D;将该蛋白冷冻干燥后得到一种淡黄色的粉末,既纯化的抗菌蛋白.
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