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黑木耳[Auricularia heimuer]为木耳属模式种,典型的胶质真菌,是我国第二大食用菌。近年来在国家供给侧改革及精准扶贫的政策背景下,黑木耳产业迅速发展。产区由东北传统主产区向南、向西新兴产区扩展,形成了“北耳南扩”产业格局。随之而来气候条件、生态条件、栽培环境、栽培原料种类均发生了显著变化,导致现有黑木耳品种无法满足产业的发展。我国黑木耳遗传育种研究起步较晚,无国外先进研究成果供借鉴。为推动黑木耳产业发展,本文在黑木耳种质资源评价的基础上,开展了种质创新研究,集成创新黑木耳种质杂交创新的流程与关键技术,为生产和遗传研究提供优良种质,为同行开展相关研究提供参考。本研究收集了国内32株黑木耳种质资源(7株栽培菌株、24株野生菌株、1株栽培菌株),开展了体细胞不亲和性、农艺性状、酯酶同工酶等方面综合评价研究,筛选优良亲本,采用单-单杂交方法,创制出3份优良种质。具体结果如下:1、种质资源评价(1)对32株供试菌株进行体细胞不亲和性试验,所有供试菌株之间均产生拮抗线,表明各菌株间存在较大遗传差异。(2)对32株供试菌株进行酯酶同工酶试验,结果表明,酯酶同工酶共出现22条迁移率不同的酶带,1条基础酶带,迁移率为0.67。根据NTSYS聚类分析表明菌株间具有丰富的遗传多样性,在相似系数为0.70时,供试菌株被聚类成五个类群。通过分析结果可知,来源地不同的菌株的差异性较大,来源不同地区的菌株的相似性较小,来源于同一地区的菌株的相似性较大。(3)温型试验的结果表明供试菌株在5~35℃范围内均可生长,在40℃条件下,有9株菌株可继续生长,其余菌株均停止生长。筛选耐高温菌株A025,筛选耐低温菌株A127。(4)农艺性状评价试验表明,供试菌株的生育期为81~121d。其中,早熟菌株共有6株,中熟菌株共有19株,晚熟菌株共有7株;原基发生类型有集中和分散两种类型,分别有9株和23株;子实体背部褶皱分为有褶型和无褶型,分别有6株和26株;低泡发度菌株1株,中泡发度菌株23株,高泡发度菌株8株;高产型菌株1株,中产型菌株1株,低产型菌株30株。(5)建立颜色评价指标,将供试菌株分为深色(L*小于21)、中色(L*值为21~31)、浅色(L*大于31)三种类型菌株,深色菌株5株,中色菌株17株,浅色菌株10株深色菌株5株,中色菌株17株,浅色菌株10株。2、种质创新(1)以生育期产量互补的野生菌株A184(早熟但中高产)和栽培品种A014(产量高中早熟)为亲本,通过单-单杂交方法共创制出100个杂交组合。经过杂交菌株的真实性鉴定,最终获得38个真实性杂交菌株,进行出耳筛选。获得早熟和深色无褶菌株CB31,生育期和亲本A184相同,短于亲本A014;获得泡发度高无褶菌株CB17;获得高产无褶菌株CB05,产量比亲本A014高出5.66%,比亲本A184高出21.71%。(2)集成创新出黑木耳种质杂交创新的流程与关键技术:确定种质创新目标→选择目标性状互补亲本→子实体培养→单孢分离→双重荧光染色鉴定“单核菌株”真实性→选择生长势强的单核菌株进行单-单杂交制备“杂交菌株”→“杂交菌株”真实性鉴定→选择与双亲生理特性差异大的杂交菌株→选择与双亲生化特性差异大的杂交菌株→出耳培养→初筛、复筛出农艺性状表现超亲的特异种质。