论文部分内容阅读
目的:研究术前局部注射血管内皮生长因子(Vascolar Endothelial Growth Factor,VEGF)对大鼠背部随意皮瓣成活的影响,探讨其作用机理,为临床实验和应用提供理论基础。
方法:选用20只4月龄Wistar大鼠,均为雄性,体重270g±30g,随机分为A、B两组,每组10只。A组(实验组):术前7天注射VEGF,B组(对照组):术前7天注射磷酸缓冲盐(PBS)溶液。将大鼠用2％的戊巴比妥钠(0.2ml/100g)腹腔注射麻醉,背部脱毛后,在背部设计2cm×8cm的随意皮瓣,蒂部位于双侧髂棘连线,皮瓣远端位于头侧。在设计皮瓣上用1cm方格划线标示,并用墨汁纹刺固定。A组术前7天于拟形成的皮瓣内一次性皮下注射280ng VEGF,B组术前7天于拟形成的皮瓣内一次性皮下注射相同体积的磷酸缓冲盐(PBS)溶液。7天后所有大鼠在麻醉下形成随意型皮瓣,并于皮瓣中线上中点处取0.5cm×0.5cm全层组织留做标本,皮瓣原位缝合。所有动物在皮瓣形成后观察皮瓣成活情况,并于术后第7天处死大鼠,测量皮瓣成活面积,计算成活率。将术中留取的组织标本进行常规苏木精-伊红(HE)染色,进行组织病理学观察,并进行PCNA、CD34免疫组化检测,对CD34阳性血管作(血管密度)计数,计算局部组织微血管密度(MVD)。
结果:1.外科观察:实验组皮瓣远端坏死范围较小,近端存活皮瓣外观红润,质地柔软,皮瓣周边伤口炎症反应轻微,组织水肿不明显。对照组皮瓣远端坏死范围较大,近端存活区皮瓣外观稍欠红润,质地稍硬,周边伤口炎症反应稍重,皮瓣水肿较明显。2.皮瓣存活率检测:皮瓣存活率为皮瓣存活区与皮瓣总面积之比。实验组皮瓣存活率为67.12％,对照组皮瓣存活率为40.69％,两组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。3.组织学检查:标本HE染色,实验组皮瓣组织表皮变薄,皮下有大面积肉芽组织增生,皮肤附属器丰富,血管内皮细胞显示增生。对照组表皮正常,角化正常,皮下肉芽组织增生不明显,皮肤附属器相对较少,血管内皮细胞增生不明显。4.增殖细胞核抗原(PCNA)的检测:用免疫组织化学方法检测大鼠皮瓣中PCNA蛋白的表达。PCNA主要在皮肤的棘层及基底细胞层和真皮层毛囊、皮质腺表达。表现为细胞核着色,阳性染色呈棕黄色颗粒物。随机选取5个视野(100×),利用FR-988生物显微图象分析系统对PCNA蛋白表达进行分析,用平均灰度值来表示,平均灰度值大(染色强度弱、透光度强)蛋白表达少,反之则表达多。实验组(A)平均灰度为64.37±0.91,对照组(B)平均灰度为68.71±2.07,实验组(A)较对照组(B)PCNA表达增强,结果分析有统计学意义(P<0.01)。5.皮瓣内微血管密度(MVD)检测:采用免疫组织化学方法检测大鼠皮瓣中CD34蛋白的表达,利用FR-988生物显微图象分析系统对CD34蛋白表达进行分析,CD34主要在毛细血管、小动脉和小静脉内皮细胞表达,阳性染色呈棕黄色颗粒物。在高倍镜下取5个视野,用显微镜测微尺进行计数,以细胞个数/mm2为单位。实验组(A)平均微血管密度为21.10±1.16,对照组(B)平均微血管密度为16.70±1.45,实验组与对照组结果分析有统计学意义(P<0.01)。
结论:术前局部皮下注射VEGF,能够提高大鼠背部随意皮瓣成活率。其作用机制可能与VEGF促进局部组织血管新生,增加组织微血管密度,改善皮瓣微循环有关。