【摘 要】
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目的通过转染针对早期生长反应因子-1(early growth response factor-1,Egr-1)的诱骗寡核苷酸(Egr-1 decoy ODNs)到大鼠动脉血管平滑肌细胞中,检测各组早期生长反应因子-1、
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目的通过转染针对早期生长反应因子-1(early growth response factor-1,Egr-1)的诱骗寡核苷酸(Egr-1 decoy ODNs)到大鼠动脉血管平滑肌细胞中,检测各组早期生长反应因子-1、基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinases-9,MMP-9)表达变化及测量各组平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell, VSMC)的迁移,探讨针对早期生长反应因子-1的诱骗寡核苷酸对体外培养的大鼠平滑肌细胞迁移的影响和作用机制。方法通过组织块贴壁法进行原代大鼠动脉血管平滑肌细胞培养、传代培养和鉴定,设计合成Egr-1诱骗、诱骗对照寡核苷酸。转染人工合成的针对Egr-1的诱骗寡核苷酸(Egr-1 decoy ODN),将培养的平滑肌细胞分为对照组(正常培养细胞)、诱骗组(转染Egr-1的诱骗寡核苷酸)、诱骗对照组(转染Egr-1诱骗杂码寡核苷酸)。免疫组织化学染色法检测各组不同时间Egr-1及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达,进行图像分析。对各组采用划痕法测定平滑肌细胞的迁移距离。所有数据均采用SPSS13.0统计软件进行统计分析,计量资料以均值±标准差(x±S)表示,各组间比较应用单因素方差分析,P<0.05有统计学意义。结果成功进行原代VSMC培养,经细胞鉴定培养细胞为高纯度的血管平滑肌细胞。转染Egr-1诱骗寡核苷酸后,用免疫组织化学法分别观察各组不同时间点的Egr-1和MMP-9蛋白的表达情况。实验发现：Egr-1诱骗寡核苷酸转染后诱骗组的迁移距离明显低于诱骗对照组和对照组(P<0.05),诱骗对照组和对照组没有明显的差异。同时发现Egr-1诱骗寡核苷酸转染后Egr-1及MMP-9蛋白在诱骗组的表达较低,与诱骗对照组和对照组比较具有统计学差异。结论本实验通过体外转染Egr-1的诱骗寡核苷酸在一定程度上能够通过抑制Egr-1蛋白的表达,抑制其下游MMP-9基因的表达,减少血清诱导的平滑肌细胞的迁移,从而达到抑制细胞迁移的目的。
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