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目的 过去,人们比较重视心肌细胞主动收缩力的产生和影响机制,而忽略了心肌细胞被动生物力学特性。然而,根据近年来大量的研究结果,我们提出在心肌细胞病理情况下,后者可能更为重要。本研究目的就在于观察肥大心肌细胞骨架、生物力学特性的变化规律,并进一步阐明细胞骨架改变对肥大心肌细胞生物力学特性的具体影响及其调节机制。 方法 利用分步消化—差速贴壁法培养新生Wistar大鼠心肌细胞。将肾上腺素加入心肌细胞建立肥大心肌细胞模型后,再分别加入细胞骨架干预剂秋水仙素(Col,细胞骨架微管解聚剂)、细胞松弛素D(Cyto-D,细胞骨架微丝解聚剂)和紫杉醇(Taxol,细胞骨架微管聚合剂)。同时,在培养的肥大心肌细胞中加入Genistein以抑制蛋白酪氨酸激酶(PTK)活性。光学显微镜下观察心肌细胞搏动频率;利用同步摄像技术和计算机图像分析系统测定心肌细胞收缩前后表面积,心肌细胞收缩幅度以心肌细胞收缩前后表面积的变化表示;通过微管吸吮法检测心肌细胞粘弹性。RT—PCR法检测心肌细胞骨架蛋白(包括微丝蛋白actin、α-actinin、微管蛋白α-tubulin以及结蛋白desmin)mRNA的表达。分别采用免疫细胞荧光化学与Western Blot检测细胞骨架蛋白的分布、密度及含量。同时,我们还通过Western Blot测定了细胞骨架蛋白磷酸化水平。此外,我们采用PTK活性检测试剂盒测定了细胞骨架相关蛋白激酶的活性。 结果 与正常心肌细胞比较,肾上腺素作用后12h心肌细胞的收缩频率增快,收缩幅度增强(P<0.05),其粘性系数显著增大(P<0.01),而弹性系数明显减小(P<0.01)。随着肾上腺素作用时间的延长(加入肾上腺素作用后12h、24h、48h及72h),心肌细胞的收缩频率及收缩幅度均不断增加,粘性系数持续增大,而弹性系数则不断减小;RT-PCR结果显示与正常心肌细胞比较,肥大心肌细胞内细胞骨架各成分mRNA表达显著增强(P<0.01)。免疫荧光化学及Western blot结果表明肥大心肌细胞骨架成分蛋白含量、密度与正常心肌细胞比较均明显增加(P<0.01),但细胞骨架的分布不均匀,排列紊乱而不规则;同时,肥大心肌细胞骨架各成分蛋白的磷酸化水平明显升高