mir-203与SOCS3的相互作用及其在HaCaT细胞中的机制研究

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[研究目的]  microRNAs(miRNAs)是一种类似于siRNA的,长约19~25个核苷酸的小分子非编码RNA,广泛存在于动植物和哺乳动物体内,它能与靶分子3端非编码区域(3-untranslated region,3UTR)特异性结合,能抑制转录后翻译或蛋白降解,从而参与细胞增殖、凋亡、分化、代谢、发育、肿瘤转移等多种生物学过程。估计有1048种miRNAs参与了人类基因的调控。因此,对于microRNAs的作用,尤其是其靶基因的鉴定和研究,是目前研究的主要热点之一。  MiR-203是一个皮肤特异性表达的miRNA,并在银屑病的表皮中表达增加,与此同时,SOCS3(STAT-Induced STAT Inhibitor3)的表达下降。在肿瘤中的大量研究显示:miR-203具有抑制细胞增殖的作用,并能与特异性的靶分子结合从而在疾病的发生发展中发挥重要作用。  鉴于以上研究背景,在本研究中我们主要探讨miR-203与SOCS3之间的关系,以及在人类永生化细胞株(HaCaT)细胞中作用机制。  [研究方法和结果]  1.基于生物信息学在线软件预测及数据库比对的方法,发现SOCS3基因3UTR区位于miR-203结合的“种子”序列上,预测两者可能存在相互结合从而改变基因表达水平。  2.通过荧光素报告基因分析方法,观察miR-203与SOCS3的结合情况,在外源给予‘mimic miRNA-203’序列和包含SOCS3基因3UTR区的荧光素酶报告基因载体共同转染HEK293T细胞的实验中,发现荧光素酶报告基因的活性下降。  3.采用western blot的方法进一步验证了miR-203对SOCS3表达的影响,采用miR-203的模拟剂瞬时转染HEK293T细胞后,SOCS3的蛋白水平显著降低。  4.采用western blot的方法观察miR-203的模拟剂对STAT3(Signal Transducers and Activators of Transcription,are transcription factors3)信号通路的影响。  5.采用流式细胞仪的方法。我们发现miRNA-203模拟剂能增加在S期的细胞数量。  6.为进一步了解miRNA-203在银屑病治疗中的作用。阿维A诱导的HaCaT细胞外源性给予miR-203的抑制剂,采用流式细胞仪观察其细胞周期。我们发现阿维A能增加S期细胞数量,减慢细胞增殖,但这种效应被miR-203的抑制剂所逆转。  [结论]  1.SOCS3基因是miR-203的一个潜在靶基因;  2.miR-203负向调控SOCS3,并活化STAT3信号通路;  3.阿维A能影响HaCaT细胞的细胞周期,这种作用能被miR-203的抑制剂所逆转;
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