新型表面等离子体共振DNA传感技术的研究

来源 :湖南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lp999999
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
核酸(包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA))是解释多种生命现象的关键,已成为生命科学最重要的研究领域之一。DNA传感技术通过固定化的已知序列的探针和目标DNA分子杂交,并将杂交的过程和结果以光、电等易于测量的物理信号表达出来,从而获取目标DNA分子的浓度、序列等信息,具有快速、灵敏、操作简单、无污染等特点,是DNA研究的重要手段,广泛应用于突变检测、基因筛选、基因诊断、药物的研制与开发等领域。并且随着相关研究的日益深入,对DNA传感技术在灵敏度、选择性、数据通量、微型化、智能化等方面提出了越来越高的要求。本论文首先对几种常见的DNA传感技术的原理、应用及其发展趋势进行了简要的综述,然后重点以表面等离子体共振(Surface plasmon resonance, SPR)传感技术作为研究手段,循着DNA传感技术的发展方向,开展了以下工作:(1)引入纳米金颗粒催化增长技术,构建了高灵敏的SPR DNA传感器。纳米金颗粒催化增长是一种有效的提高灵敏度的技术,但是颗粒增长过程中会有金属沉积在金膜表面而引起背景升高。为解决这一问题,在金膜表面真空溅射了一层25 nm厚的SiO2薄膜。该传感器可检测低至4.8 pM的cDNA,与SPR传感器直接检测(金膜表面镀有SiO2)相比,其检测下限降低了250倍。本研究工作发展的方法具有通用性,可扩展到其他采用金属基底的分析方法中。(2)结合自组装多层膜修饰技术和纳米金颗粒催化增长技术,构建了高灵敏的SPR DNA传感器。本部分工作发现,通过层层自组装技术修饰在金膜表面的自组装多层膜(PAH/PSS)3可以像SiO2层一样,有效地阻挡金属沉积于金膜表面。该传感器的检测下限为1.8 pM cDNA,与SPR传感器直接检测(金膜表面修饰有自组装多层膜)相比,其检测下限降低了约56倍。本研究工作中膜的制备简单、不需要昂贵的仪器设备和专业技术人员,也可以进一步扩展应用于其他采用金基底的分析方法中。(3)利用SPR技术研究了固定化DNA单层的电致开关行为。设计了一种由金膜与氧化铟锡导电玻璃组成的类电容式流通池,以避免电场对金膜本身的SPR光谱的影响。利用该流通池研究了电场对固定化DNA探针的作用。由结果可推测,金膜所带电荷的性质可使固定化DNA探针“平躺”或“直立”在金膜表面,且电场调控下的固定化DNA探针的取向变化与电场强度和DNA探针的表面覆盖率密切相关。通过研究不同状态下的DNA杂交情况,发现DNA杂交效率与DNA探针的取向密切相关:DNA探针呈“直立”状态时有利于杂交,反之亦然。由于很多生物分子是荷电的,该工作还有可能为构建更高灵敏度的生物传感器件、生物芯片及纳米电子装置提供一种新的手段。同时,该工作也为功能化表面,如可控、可逆“开关”表面的研究提供了一种新的思路。(4)采用SPR传感器作为检测手段,利用纳米金颗粒的荷电性发展了一种识别单碱基错配能力的方法。由于单碱基错配DNA(smDNA)可与DNA探针进行部分杂交,引起信号变化,从而干扰cDNA的检测以及出现假阳性结果。本部分工作发展了一种利用纳米金颗粒辅助的电洗脱方法,既可除去smDNA杂交引起的信号变化,又可确保cDNA杂交引起的信号基本不变。该方法简便易行,所需探针设计及制备方便,成本低,易于普及,不但为识别单碱基错配DNA提供了一种新的手段,而且为构建高选择性的生物传感器提供了一种新的思路。(5)将纳米金颗粒催化增长与电洗脱方法相结合,构建了高灵敏、高选择性的DNA传感器。本部分工作首先考察了金膜荷负电时(PAH/PSS)3层的稳定性,发现在一定的电位范围内,电洗脱对(PAH/PSS)3修饰的金膜没有影响。在此基础上,引入纳米金颗粒催化增长增强SPR DNA传感器的信号,然后利用电洗脱除去smDNA杂交引起的信号变化。该传感器有效地结合了纳米金颗粒催化增长技术和纳米金颗粒辅助的电洗脱技术,既能高灵敏地检测cDNA,又能避免smDNA的干扰,对于复杂生物样本的检测具有重要的实用价值。
其他文献
为探究现金流权与控制权的分离对我国家族上市公司价值的作用机理以及影响程度,本文首先建立了一个基于控制权私人收益的理论模型。然后,本文以121家家族上市公司为样本,对现
当前,我国教育进入内涵式发展阶段,为不断提升教育质量,社会各界都在贡献自己的力量,高校经费的来源也因此更加多样化。虽然高校经费得初衷是为提升办学条件和教学质量提供物
岩石在诸多工程领域中除受到恒定的静荷载作用外,还常常会受到如爆炸、冲击、震动等动荷载作用,如隧道围岩除承受围岩应力等静荷载作用外,还会受到车辆荷载等动荷载作用。周
3-6岁是幼儿语言发展的黄金时期,因此在幼儿园阶段能够采取有效的措施,帮助幼儿开发语言,对促进幼儿的语言发展是有绝佳好处的。而分享阅读法在幼儿语言开发中具有重要运用价
随着宽带卫星通信系统加上空间网络技术的不断突破,卫星通信进入互联网应用时代从理想变为了现实,低轨道卫星在未来5G甚至6G的发展过程中将扮演重要角色。而软件定义网络(Software Defined Network,SDN)控制转发分离、编程接口开放化和控制集中化的三大特点为未来低轨道卫星网络的发展方向提供了新的思路。首先,本文在介绍SDN的空天地网络系统的发展现状的基础上,分析了以OneWeb为代
中小企业是推动我国经济发展的重要力量,在经济社会协调发展方面发挥着重要作用。如何充分重视政府转型在中小企业发展中的特殊作用。学者提出,政府要转变基本理念,促进中小企业
有机磷酸酯(OPEs)具有良好的阻燃性,以及增塑和润滑效果,广泛应用于建筑材料、电子产品、塑料制品、家具和纺织品中。由于其使用量大并容易进入环境,以及具有神经毒性和致癌
"专精特新"是中小企业转型升级的必由之路。为提高这些中小企业的国际竞争力,上海应加强供给侧结构性改革,促进企业创新驱动发展;构建区域协同创新体系,合力提升国际竞争力和
根据卫星模型太阳能帆板平面相对卫星主体较大的特点,提出了共形边界的概念,即总场边界、外推边界和吸收边界的几何形状与目标外形轮廓相同.并把它应用在卫星模型时域有限差
“深化财税体制改革”、“健全地方税体系,稳步推进房地产税立法”,房地产税上升至法律意识再次成为社会关注热点。房地产税的出台不再是调控房地产市场的一种政府行政行为,而是建设国家现代税制体系的一种税收法制治理行为,集中体现着政府与纳税人、中央与地方、法律与行政、社会公众纳税意识等多重关系,需谨慎、科学推进。房地产税立法,除不动产登记制度等基础条件外,开征房地产税的关键前提条件是明确税基,并对房地产税税