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鼻咽癌是极具地方特色的恶性肿瘤，中国华南地区尤其是广东省是鼻咽癌发病率最高的区域，是世界低发地区的数十倍。鼻咽癌的发病原因至今还不十分清楚，普遍认为与遗传，环境，EBV感染等因素有关。鼻咽癌发病过程包括正常-轻度异型增生/化生-重度异型增生/化生-原位癌-浸润性转移癌等步骤，此外，鼻咽癌也是恶性程度较高的肿瘤，甲．期即可发牛颈部淋巴结转移。因此如果对鼻咽癌的研究有突破，将可能为整个肿瘤病因学及发牛发展机制的研究提供一个具有典型意义的模型。我们实验室已建立了首个原本实验拟用人端粒酶催化亚单位诱导鼻咽上皮永生化，以便建立携带癌前病变分子特征的细胞株，对于阐明鼻咽癌早期发生的分子事件具有重要意义，然后在永生化鼻咽上皮的基础上建立稳定表达LMP1，BARF1的细胞，研究其恶性转化功能。
研究目的：
建立能反映鼻咽癌癌变过程中不同时期的模型，为进一步阐明鼻咽癌的发病机制提供信息。
实验方法：
收集非鼻咽癌活检组织(男性)，原代培养，建立正常鼻咽上皮细胞，用hTERT诱导鼻咽上皮细胞永生化。在永生化鼻咽上皮细胞的基础上建立稳定表达LMP1和BARF1的细胞，并且检测它们能否恶性转化鼻咽上皮细胞。
1．细胞培养：建立永生化的鼻咽上皮细胞及稳定表达EBV基因LMP1，BARF1的鼻咽上皮细胞2．Western B10tting：在翻译水平检测各蛋白的表达3．端粒酶活性测定：判断细胞永生化的标志性实验之一4．端粒长度测定：判断细胞永生化的标志性实验之一5．倍增曲线分析：分析细胞倍增速率，倍增倍数6．三维培养：模拟体内环境下的生长方式并分析形态差异7．侵袭实验：比较几种细胞在侵袭功能上的差异8．生长因子依赖性实验：比较几种细胞对生长因子的依赖性9．染色体核型分析：判断细胞是否有染色体核型改变10．软琼脂集落形成实验：比较几种细胞锚定非依赖性生长方式及集落形成能力实验。
结果：
1．建立了N5-hTERT永生化的鼻咽上皮细胞N5-hTERT细胞形态变小，变圆，有很多小细胞长出，折光增强，很有活力。但不形成重叠生长。而N5-pBABE细胞扁平多角形，贴壁生长，细胞间形态，大小不一致，在光镜下细胞活力不强，存在接触抑制，未见重叠生长。大约7天左右传代一次，细胞传到第7代左右时，细胞就开始出现衰老死亡，细胞体积变大，形态不规则。端粒酶活性结果显示，通过外源性hTERT表达诱使细胞恢复端粒酶活性，细胞端粒和增值活性保持稳定， N5-hTERT的端粒酶活性随着细胞的永生化显著增强。端粒长度比N5明显缩短，但从第10代开始维持稳定。倍增曲线结果显示N5-hTERT比N5-PBABE生命复制周期明显延长，倍增倍数显著增加，倍增到80CPD左右。。N5-hTERT在三维培养中主要出现网状结构，与N5在三维培养的形态相近。染色体显示N5-hTERT-P5染色体依然表现为正常男性染色体， N5-hTERT-P11 染色体为 47，XY，+der(22)t(22；?)，der(?)t(22；?)。22号染色体出现异常。N5-hTERT在软琼脂实验中未见克隆形成，而软琼脂实验是检测体外恶性转化的重要实验之一，N5-hTERT无恶变倾向。侵袭实验结果显示N5-hTERT不能穿出Transwell小室，我们认为N5-hTERT并无恶性转化功能。
2．建立了稳定表达LMP1及BARF1的鼻咽上皮细胞；
3．LMP1对N5-hTERT的恶性转化作用三维培养结果显示N5-hTERT-LMP1形成形态不规则的大克隆，细胞连接松散，有很多伪足伸出，有向外扩张的趋势。N5-hTERT-LMP1可导致细胞出现多倍体，出现多条染色体的易位，缺失，甚至出现四倍体，肿瘤细胞核型，在Transwell实验中，细胞穿出能力比N5-hTERT显著增强，且具有统计学意义(P=0.000)。在完全培养基中，N5-hTFRT-LMP1与N5-hTERT无显著差别。但是在10﹪EGF，BPE的培养基中，从第5天开始N5-hTERT-LMP1比N5-hTERT的牛长明显增快(P=0.000)，在无生长因子的培养基中，从第3天开始N5-hTERT-LMP1比N5-hTERT的牛长明显增快(P=0.001)，表明N5-hTERT-LMP1对生长因子的依赖性降低，具有恶变倾向。
4．BARF1对N5-hTERT的恶性转化作用三维培养结果显示N5-hTERT-BARG1形成边缘光滑的大克隆，无伪足伸出。但是BARF1不能引起染色体核型变化。在细胞侵袭性实验中，N5-hTERT-BARF1的细胞能够穿出Transwell小室，与N5-hTERT差异显著(P=0.000)。在生长因子依赖性实验中，N5-hTERT-BARF1与N5-hTERT无显著差别，但是在10﹪EGF，BPE的培养基中，从第5天开始N5-hTERT-BARF1比N5-hTERT的生长明显增快(P=0.000)，在无生长因子的培养基中，从第3天开始N5-hTERT-BARF1比N5-hTERT的牛长明显增快(P=0.013)，表明N5-hTERT-BARF1对生长因子的依赖性降低，具有恶变倾向。
实验结论：
1．由单基因hTERT诱使鼻咽上皮细胞永牛化的细胞，但无恶性转化的功能。关于hTERT永生化的鼻咽上皮细胞国内外至今尚未见报道。为我们实验室在建立永生化鼻咽上皮细胞的方面进一步积累了宝贵经验。
2．在N5-hTERT永牛化的鼻咽上皮细胞的基础上，建立了稳定表达LMP1的鼻咽上皮细胞，这对于研究鼻咽癌的恶变机制具有重要意义。
3．在N5-hTERT永生化的鼻咽上皮细胞的基础上，建立了稳定表达BARF1的鼻咽上皮细胞，体外实验证实BARF1能使永生化的鼻咽上皮细胞恶性转化，这是第一次证实BARF1能使鼻咽上皮细胞恶性转化，为进一步研究EBV的致病机制提供了前景。
本实验的研究目的就是探索Mel-18在乳腺癌组织的表达情况，研究其与临床资料间的关系，并分析其预后意义。
研究目的：
揭示Mel-18在乳腺癌的表达情况，探讨Mel-18与临床病理特征的关系，分析其与预后的关系，为乳腺癌的预防，诊治，筛查，预后提供新的信息。
实验方法：
收集137例乳腺癌组织及30例癌旁组织， 137例癌组织中，有75例标本来源于2002年以前的标木，62例来源于2004-2005年的标本，30例癌旁组织也来源于2002年以前的标木。用免疫组织化学方法对这些组织进行Mel-18与Bmi-1的检测，统计学软件SPSS 13.0进行数据处理。
实验结果：
54(37.9﹪)例癌组织显示Mel-18阳性，88(64.2﹪)例癌组织显示Bmi-1阳性，5(3.6﹪)例显示两者均阳性。26(86.7﹪)例癌旁组织显示Mel-18阳性，仪仪13(43.3﹪)例癌旁组织显示Bmi-1阳性，9(30﹪)例癌旁组织两者均阳性。103(75.2﹪)例显示核阳性，34(24.8﹪)例显示浆阳性。而且Bmi-1在癌巢边缘表达高，Mel-18在正常导管组织，癌旁组织比癌组织表达高。统计结果提示，无论在癌旁组织(p=0.000)还是在癌组织(p=0.013)Mel-18与Bmi-1表达负相关。而且Mel-18也与T分期(p=0.001)，淋巴结转移(p=0.002)，临床分期(p=0.000)，ER(p=0.005)相关。Bmi-1与T分期(p=0.025)，淋巴结转移(p=0.001)，临床分期(p=0.000)，ER(p=0.024)， PR(p=0.046)相关。多因素分析结果提示联合检测Mel-18和Bmi-1对乳腺癌的的预防，诊治，筛查，预后有意义(p=0.027)。生存曲线显示乳腺癌组织高表达Mel-18，病人预后较好，五年牛存率也较高。高表达Bmi-l的病人预后差。
实验结论：
1．Mel-18在乳腺癌的表达与Bmi-1密切负相关。
2．Mel-18，Bmi-1影响乳腺癌的预后，对乳腺癌的预防，筛查，诊断提供了新的前景。