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第一部分糖皮质激素诱导了HEK293/tau细胞的阿尔茨海默病样病变 目的：本部分研究旨在证实糖皮质激素(glucocorticoids,GC)能否在阿尔茨海默病样细胞模型(HEK293/tau)中诱导阿尔茨海默病样病变,并探讨其可能信号调节机制。 方法：地塞米松(dexamethasone,DEX)分别处理转染人tau441的人胚肾293细胞(HEK293/tau)和野生型的人胚肾293细胞(HEK293/wt),采用CCK-8法检测DEX对细胞活力的影响,Westernblot研究两组细胞tau蛋白磷酸化(p-T205)和非磷酸化(Tau-1)及其上游激酶糖原合成激酶-3β(GSK-3β),ps9-GSK-3β水平的变化,并加用GSK-3β的抑制剂LiCl,观察其对糖皮质激素介导的tau蛋白过度磷酸化相应的逆转作用。 结果：CCK-8细胞活力检测结果显示,较之HEK293/wt细胞,DEX处理48h引起了HEK293/tau组细胞活力的下降(t=6.60,P<0.05);Westernblot结果显示,与HEK293/wt组相比,DEX引起了HEK293/tau组细胞ps9-GSK3β水平的增加(t=7.01,p<0.05),p-T205和Tau-1蛋白表达量相应增加和减少(t=5.51;t=3.86,p<0.05),而LiCl可以相应逆转上述改变。 结论：在人tau存在的前提下,GC增加了HEK293/tau细胞的毒性损伤作用,并通过上调GSK-3β的活性,增加了tau蛋白过度磷酸化。 第二部分Wnt/β-catenin信号通路参与调节糖皮质激素诱导的HEK293/tau细胞的凋亡 目的：探讨Wnt/β-catenin信号通路在糖皮质激素(glucocorticoids,GC)诱导的细胞凋亡中的作用。 方法：地塞米松(dexamethasone,DEX)分别处理转染人tau441的人胚肾293细胞(HEK293/tau)和野生型的人胚肾293细胞(HEK293/wt),采用Westernblots技术检测两组细胞糖原合成激酶-3β(GSK-3β),ps9-GSK-3β水平及其β-连环蛋白(β-catenin),p-β-catenin,bcl-2蛋白含量的变化,并加用GSK-3β的抑制剂LiCl,观察其对相关蛋白相应的逆转作用。 结果：Westernblots结果表明,较之HEK293/wt细胞,DEX引起了HEK293/tau组细胞ps9-GSK3β,β-catenin,bcl-2水平的下降(t=7.01;t=7.09;t=7.30,p<0.05),p-β-catenin相对磷酸化水平的增加(t=5.27,P<0.05),加用LiCl可以相应逆转上述改变。 结论：在人tau存在的前提下,GC通过上调GSK-3β的活性,抑制Wnt/β-catenin信号转导通路,促进了HEK293/tau细胞的凋亡发生。