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目的：
了解温州地区流行性超广谱β内酰胺酶（ESBLs）细菌的检出率，构建ESBLs基因文库，对CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶的特性进行研究。
方法：
1．收集2005年10月至2006年9月温州医学院附属第一医院临床标本分离的产ESBLs肠杆菌科细菌63株。
2．PCR及DHPLC检测：63株产ESBLs菌株分别沸水浴10分钟做为模板，先多重PCR之后，再以各组通用引物检测，之后采用DHPLC进一步分析。
3．CIX-M-3、SHV-1重组质粒的构建：PCR扩增CTX-M-3、SHV-1的完整编码基因，和pET28a质粒重组。提取重组质粒进行内切酶双酶切和测序鉴定。
4．CTX-M-3重组蛋白的诱导表达、活性检测，以及重组蛋白纯化的初步探索：IPTG诱导CTX-M-3重组质粒感染菌BL21表达重组蛋白，收取表达上清进行重组蛋白的活性研究，计算出分解抗生素的米氏常数Km值。并且使用AKTA纯化系统，对CTX-M-3重组蛋白的纯化进行初步探索。
结果：
1．63株多重耐药菌株经PCR、DHPLC实验和测序：9株携带CTX-M-1组基因，除一株外，其余只检出blaCTX-M-3型基因；27株携带CTX-M-9组基因，检出主要为bla CTX-M-14型基因；2株同时携带携带blaCTX-M-3和blaCTX-M-14；检出一株携带SHV-1型基因。
2．克隆CTX-M-3、SHV-1编码基因，以及重组质粒测序并确定其基因型，构建ESBLs基因文库。
3．CIX-M-3重组酶分解所测的5种抗生素（头孢噻肟、青霉素钠、头孢呋新、头孢硫脒、头孢曲松钠），Km值分别为29．6、69．6、35．1、201．2、14．4mol/L。
结论：
产CTX-M型ESBL s的菌株流行广泛，占产ESBLs肠杆菌科细菌总数的54%，构建了ESBLs基因文库，表达的CTX-M-3重组酶能分解多种抗生素。