MYB类基因PAP1转化百合的研究

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百合是世界三大鳞茎类花卉之一,其花姿雅致,花茎挺拔,是点缀庭园、盆栽与切花的名贵花卉。但是现在市面上的百合品种花色仍然比较单一,主要为白色和粉红色,严重影响其观赏观赏价值,所以本研究的目的主要集中在百合花色的改良上,希望培育出紫色百合新品种来满足人们高品质生活的需要。 根据NCBI上登陆的PAP1cDNA(AF325123)序列设计引物,利用PCR技术从野生型拟南芥基因组当中克隆到MYB转录因子PAP1,DNA全长1376bp,其cDNA序列与报道的序列相比具有99.7%的核苷酸同源性。经Spidey软件分析,PAP1包括两个内含子,三个外显子,含有一个完整的阅读框,编码248个氨基酸;经Primer软件分析,在PAP1cDNA的571bp处有SpeI位点,与文献报道一致;经Genscan软件分析表明PAP1有MYB转录因子典型的DNA结合区域,说明PAP1克隆正确。 本实验室已经成功克隆拟南芥花特异表达启动子PCHS,并构建好瞬时表达载体pPCHS,将PAP1替代pPCHS上的GUS基因构建植物表达载体pPCHSPAP1.冻融法将pPCHSPAP1转化农杆菌,采用本实验室独创的两步外植体法将目的片段转化麝香百合。农杆菌侵染时,用附加250mg/LAS的MS液体重悬菌体可以提高转化效率;侵染过的外植体在MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+250mg/LCefo+50mg/LG418的固体培养基上分化旺盛:抗性芽在1/2MS+0.25mg/LIBA+250mg/LCefo+50mg/LG418的固体培养基上诱导生根。本实验共获得了115棵抗性植株,随机抽取其中60棵植株提取叶片总DNA进行PCR检测,有9棵PCR扩增呈阳性且与阳性对照片段大小一致,随机抽取3棵PCR扩增阳性植株进一步作Southern检测,其中2棵有杂交信号,证明目的片段已经整合到部分百合基因组中。 转基因植株的获得,将为以后利用花特异表达启动子、花特异转录因子和花色基因转化百合以及其它名贵花卉提供科学依据,为培育花卉新品种、改良花卉品质、提高花卉观赏价值,打下良好的基础。
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