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目的：双微体是基因扩增的主要载体和细胞遗传学标志，含有癌基因和耐药相关基因，因此它的存在与衰老、基因组不稳定、恶性肿瘤及细胞耐药密切相关。本课题以小鼠胚胎成纤维细胞系NIH3T3及其经氨甲蝶呤(MTX)诱导产生的含有双微体的耐药细胞系MTX100～400(可耐受100～400μmol/L MTX)为模型，应用脉冲场凝胶电泳分离双微体DNA，并对其特异性进行确认，进而获得特异性较高可应用于后续研究的双微体。同时，对分离所得双微体上扩增基因Mdm2的DNA、RNA和蛋白水平进行了检测，提示双微体的出现与细胞耐药存在着密切的联系，并为双微体上扩增基因的功能研究提供新的线索。
方法：本研究通过脉冲场凝胶电泳对耐MTX400小鼠NIH3T3细胞双微体DNA进行分离，利用Southern Blot对其分离后位置确认，分离所得的DNA应用琼脂糖酶切胶回收，并利用PCR对其特异性进行分析验证。同时，利用PCR、Quantitative RT-PCR、Western Blot等方法检测分离所得双微体上扩增基因Mdm2的两个转录本的DNA、RNA和蛋白水平。
结果：Southern Blot结果显示脉冲场凝胶电泳分离后的耐MTX400小鼠NIH3T3细胞中双微体的位置特异，PCR结果提示分离所得的双微体DNA特异性较好。高扩增基因Mdm2在MTX抗性NIH3T3细胞系中存在剪切转录本，且两个转录本在NIH3T3和MTX400两种细胞系中的DNA、RNA和蛋白水平上存在差异。
结论：脉冲场凝胶电泳方法可用来分离耐MTX400小鼠NIH3T3细胞中双微体DNA，且特异性较好。高扩增基因Mdm2在小鼠NIH3T3细胞中存在剪切转录本，并且随着MIX耐药浓度升高而表达升高，提示Mdm2高表达可能参与细胞对MTX的耐受。