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目的:探讨Erα(Estrogen Receptorα)与G蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)在雌激素促进甲状腺未分化癌FRO细胞增殖中的作用及其机制。
方法:用17β-雌二醇(17β-Estradiol,E2)、ERK1/2抑制剂PD98059(PD)、Akt抑制剂LY294002(LY)、雌激素受体抑制剂ICI182780(ICI)、构建的GPER小干扰RNA(GPER-siRNA)处理甲状腺未分化癌FRO细胞,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞周期相分布;Western blot方法检测FRO细胞中pAkt、pERK1/2、GPER、Erα、Erβ、Bcl-2、Bax蛋白的表达。
结果:不同浓度的E2(0 mol/L、10-10 mol/L、10-9 mol/L、10-8 mol/L)处理甲状腺未分化癌FRO细胞24 h,细胞增殖率分别为0、(6.5±1.1)％、(10.7±1.9)%、(16.5±2.1)%(p＜0.05);10-8 mol/L的E2处理甲状腺未分化癌FRO细胞0 h、12 h、24 h,细胞的增殖率分别为0、(8.2±1.9)%、(16.5±2.1)%(p＜0.05),S/G2/M期细胞的比例分别为(21.51±4.32)%、(37.22±4.16)%、(48.56±2.31)%(p＜0.05);即E2可促进甲状腺未分化癌FRO细胞增殖,且呈剂量时间依赖性。10-8mol/L的E2作用FRO细胞0h、12h、24h,Erα、Bcl-2的蛋白表达呈时间依赖性增加,Bax的表达呈时间依赖性减少,PD98059和LY294002抑制E2对FRO细胞的上述作用;ICI182780抑制Bcl-2的蛋白表达,对Bax的表达无影响:GPER-siRNA转染FRO细胞48 h后,与对照组相比,GPER的蛋白表达水平下降;10-8 mol/L的E2处理FRO细胞不同时间(0 min,5 min,10 min,15 min,30min),ERK1/2与Akt的磷酸化水平分别在15 min与10 min达到最大;E2作用于分别加入PD98059(30μmol/L)、LY294002(50μmol/L)的FRO细胞15 min和10 min,与E2处理组相比,ERK1/2和Akt的磷酸化水平降低,E2作用于转染GPER-siRNA质粒的FRO细胞15 min和10 min,与E2处理组相比,ERK1/2和Akt的磷酸化水平降低;E2作用于分别加入PD98059、LY294002、转染GPER-siRNA质粒及ICI182780的FRO细胞24 h,与E2处理组相比,细胞的增殖率从(16.5±2.1)%分别降低到(11.2±1.3)%、(9.6±1.5)%、(7.2±1.3)%和(6.9±1.6)%。
结论:E2既通过与核雌激素受体Erα结合,作用于Bcl-2的雌激素应答元件,促进FRO细胞的增殖;也可通过作用GPER,激活Akt、ERK1/2通路,从而促进FRO细胞增殖。