论文部分内容阅读
目的:细胞自噬是其既可为细胞的保护机制，也可为细胞的死亡方式，是目前分子生物学研究热点之一。惊厥是儿科最常见的急重症之一，若出现频繁或者严重的发作，会造成一定程度的脑损伤，而惊厥引起脑损伤机制更深层次的分子生物学机制仍不清楚，以致至今仍无特效的治疗方法。基于有研究表明惊厥脑损伤与细胞自噬及细胞凋亡在分子水平上有一定关联性，从而提出惊厥脑损伤时存在神经细胞自噬，本实验重点研究细胞自噬以及其相关蛋白LC3蛋白的表达与惊厥性脑损伤的关系，从而寻找惊厥脑损伤新的治疗靶点。 方法:动物模型的建立和实验分组:将健康的SD大鼠（哈尔滨医科大学第二附属医院实验动物中心所提供）60只，日龄21d，雌雄各半，体重60-90g，平均体重（72.4±3.5）g。随机分为对照组10只和惊厥组50只，其中惊厥组在大鼠最后一次抽搐后再随机平均分为五个亚组，分别为发作后0h组、3h组、6h组、12h组、24h组，每组各10只，各组大鼠之间比较无差异（P＞0.05）;模型的建立:惊厥组:按40mg/kg的剂量戊四氮腹腔注射，根据动物的发作情况再追加戊四氮，剂量为上一次的一半，以此类推，直至大鼠出现Ⅳ级或Ⅴ级发作为止，即造模成功，反复抽搐7次;对照组:大鼠注射同等容量的生理盐水。在最后一次抽搐发作后0h、3h、6h、12h、24h断头取大鼠海马组织，制成石蜡切片进行HE染色与免疫组织化学染色，检测大鼠脑损伤情况与LC3表达情况。 结果:大鼠模型建立符合标准，大鼠海马细胞HE染色结果显示:对照组大鼠海马细胞形态大体正常，细胞皱缩、破裂、细胞核溶解、碎裂等现象少见;惊厥组大鼠海马神经细胞萎缩、细胞核浓缩、碎裂等明显可见，并且在6h、12h、24 h时异常的细胞形态明显高于对照组，尤以24h时最显著，两组比较差异显著(P＜0.05)，有统计学意义;大鼠海马细胞LC3的免疫组织化学结果:自噬相关蛋白LC3位于细胞胞质，其阳性表达以胞浆为主，阳性细胞表现为棕黄色;对照组海马细胞内LC3呈弱阳性表达，惊厥组阳性细胞则密集分布，LC3表达强度明显高于对照组，并且惊厥后细胞自噬相关蛋白LC3表达立即增加，在6h时表达量最大，惊厥组6h、12h、24 h时LC3表达与对照组比较差异显著(P＜0.05)，有统计学意义。 结论:对照组大鼠的海马细胞损伤轻微，细胞自噬相关蛋白LC3呈弱阳性表达;惊厥组大鼠海马内异常形态的细胞明显增多，自噬相关蛋白LC3的表达明显上调，时间相关性强，说明惊厥后脑损伤符合神经元自噬的分子生物学特点，在一定程度上表明惊厥性脑损伤与神经细胞自噬有关联。但细胞自噬与惊厥性脑损伤的机制均很复杂，两者具体的关系以及在信号通路的联系处仍需进一步研究，有望通过研究细胞自噬与惊厥性脑损伤的关系，寻找惊厥脑损伤新的治疗靶点。