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研究目的：本课题旨在从细胞和动物水平研究中频交变微电流对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用,并将微电流与化疗药物联合应用,观察二者是否具有联合增敏作用,并且探讨其可能的作用机理,从而评价中频交变微电流在肿瘤治疗领域应用的可能性。研究方法：1微电流对MCF-7细胞的抑制作用：用MTT比色法检测中频交变微电流对人乳腺癌细胞MCF-7生长增殖的影响；采用流式细胞术检测中频交变微电流对细胞凋亡的影响；检测中频交变微电流对细胞周围环境pH值、温度及细胞内活性氧和钙离子水平的影响,透射电镜观察中频交变微电流对细胞形态结构的影响,分析其作用机制。2微电流联合化疗药物对MCF-7细胞的抑制作用：采用表柔比星、甲氨蝶呤和顺铂三种化疗药物联合中频交变微电流治疗,用MTT法和流式细胞术评价中频交变微电流联合化疗的效果；激光共聚焦显微镜观察中频交变微电流对细胞化疗药摄取的影响；透射电镜观察细胞状态。3微电流对乳腺癌肿瘤的抑制作用体内研究：在BABL/c裸鼠右后肢皮下接种MCF-7细胞建立荷瘤鼠模型；实验动物随机分为4组：对照组、电刺激组、化疗组(表柔比星)、电刺激联合化疗组。电刺激组每次治疗施加200 kHz微电流30 mmin,进行3次治疗；化疗组腹腔注射表柔比星,剂量为7.5 mg/kg；联合组进行上述的电流刺激及化学治疗。观察肿瘤变化,记录肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,实验终止时解剖荷瘤鼠,进行病理组织学分析。研究结果：1 MTT检测表明中频交变微电流对人乳腺癌MCF-7细胞有微弱的抑制作用,抑制率约为9%。流式细胞术实验结果：对照组细胞凋亡率为0.86%±0.74%、坏死率为4.52%±1.58%；电刺激组细胞凋亡率为11.43%±6.01%、坏死率为9.14%±1.71%,提示该微电流具有促进细胞凋亡和死亡的生物学作用。中频交变微电流对细胞周围环境pH值和温度无显著影响。测量结果显示,电刺激前后,细胞培养液pH值均为7.5左右,且呈均匀分布,电刺激后温度仅升高了1.1℃。中频交变微电流能够使MCF-7细胞内活性氧水平显著升高,但对细胞内钙离子浓度无明显影响。透射电镜观察电刺激后肿瘤细胞变化很大,核膨胀,核质和胞质变疏松,细胞器变性,形成多泡体。2 MTT法及流式细胞术检测结果显示,中频交变微电流能够增加化疗药物的疗效,增加其对肿瘤细胞的杀伤作用,联合治疗组正常细胞存活率仅为38.66%±13.57%,与对照组(94.04%±0.92%)、电刺激组(71.87%±6.87%)、化疗药组(87.79%±2.34%)相比均显著降低。经激光共聚焦显微镜观察,中频交变微电流能够促进化疗药物进入细胞内部。3动物体内实验结果表明中频交变微电流可以有效地抑制裸鼠体内肿瘤的生长,与化疗药联合作用后的抑瘤效果更好。经组织学分析,电刺激可以使肿瘤组织大面积坏死但无明显毒副作用,仅皮下出现轻微炎症反应。研究结论：中频交变微电流能够有效地杀伤MCF-7细胞,抑制小鼠体内人乳腺癌细胞的生长,对传统化疗药物具有增敏的作用,并且无明显的毒副作用。其作用机制可能是促进肿瘤细胞内活性氧的升高及其改变细胞形态结构,从而造成细胞内环境的紊乱。因此,中频交变微电流有望成为一种新型的肿瘤治疗方法,不仅可以单独使用抗肿瘤,更可以作为一种临床化疗的辅助治疗手段。本研究为中频交变微电流在肿瘤治疗领域的应用提供了一定的研究基础,为肿瘤的物理治疗提供了一种新的手段。然而该参数电流更为深入的治疗作用及机理仍需大量的基础及临床实验来进一步验证。