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胃癌是最常见的消化道恶性肿瘤,尽管全球胃癌发病率呈现下降趋势,但其发病率和死亡率仍居恶性肿瘤的第2位和第4位。在我国胃癌发病率居肿瘤的第2位,每年的新发病例约占全部恶性肿瘤的17.2%,死亡率居恶性肿瘤第一位。
胃癌淋巴结转移是胃癌最重要的独立预后因素。以往对胃癌淋巴结转移的分子机制研究并未完全确切。本研究前期实验利用比较蛋白质组学方法对比淋巴结转移能力极强和极弱的两组胃癌组织,筛选和鉴定差异表达的蛋白质点,从而筛选出了与胃癌淋巴结转移相关的一系列蛋白。
本实验利用RNA干扰技术对差别最显著的一个差别转移相关蛋白14-3-3β在胃癌细胞系中进行了基因沉默,从而观察被沉默14-3-3β蛋白的胃癌细胞在生长、移行、侵袭能力、细胞周期等一系列细胞生物学变化,并利用免疫组化法对14-3-3β蛋白在胃癌组织中表达进行验证,以及对相关的临床病理学特征进行分析。
目的:探索14-3-3β对胃癌细胞的细胞生物学行为的影响以及14-3-3β在人胃癌组织分布的临床病理学意义。
方法:
体内试验:利用RNA干扰技术knock-down14-3-3β在胃癌细胞的表达,MTT法绘制细胞生长曲线,侵袭实验验证14-3-3β对胃癌细胞侵袭能力的影响,划痕试验验证14-3-3β对胃癌细胞侵袭能力的影响,流式细胞仪检测细胞周期的变化。
体外实验:免疫组化染色181例人胃癌组织标本,观察14-3-3β在胃癌细胞的分布,以及14-3-3β在不同临床病理学特征标本的分布差异。
结果:14-3-3β在胃癌细胞系中有稳定表达,特异性的siRNA可以有效抑制14-3-3β在胃癌细胞的表达,14-3-3β影响胃癌细胞的生长、移行以及侵袭能力(P<0.05),对细胞周期的影响未见差异。通过181例免疫组化结果分析,14-3-3β在人胃癌细胞浆中表达,与肿瘤直径、浆膜浸润,以及淋巴结转移病理学因素正相关(P<0.05),14-3-3β在肿瘤直径大于5厘米,浆膜浸润,淋巴结转移组别中的表达高于对应组别中的表达。浆膜浸润是胃癌淋巴结转移的独立危险因素。
结论:14-3-3β在胃癌细胞系中稳定存在,RNA干扰技术可以有效敲出14-3-3β蛋白在胃癌细胞系的表达,14-3-3β参与胃癌细胞的生长、移行以及侵袭等细胞生物学行为,14-3-3β与胃癌淋巴结转移相关。