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该文主要研究内容包括:一、室管膜下区神经干细胞的培养和形态学观察;研究目的. 寻找室管膜下区神经干细胞体外培养的方法,证实室管膜下区神经于细胞的存在.结论:4.1无血清培养基加B27可用于室管膜下区神经干细胞的体外培养,细胞可以分裂增殖,部分细胞3-5天时分化为神经原样细胞和胶质细胞样细胞.4.2有血清培养基可用于室管膜下区神经于细胞的体外培养,并可提供室管膜下区神经于细胞生长的良好环境,促进细胞的分化和轴突生长.4.3原代培养的室管膜下区神经干细胞在不同的培养基中,24小时内自动聚集成团,这是神经干细胞在体外培养过程中一个重要特征.4.4 Nestin抗体鉴定和室管膜下区细胞生长形态学特征证明我们培养的室管膜下区细胞为神经干细胞.二、视网膜细胞条件分化液对室管膜下区神经于细胞诱导作用的研究;研究目的: 观察视网膜细胞条件分化液是否能诱导室管膜下区神经干细胞为视网膜神经细胞.结论:4.1视网膜神经细胞条件分化液可定向诱导室管膜下区神经干细胞分化为视网膜神经节细胞样细胞.4.2诱导分化的细胞经细胞免疫荧光鉴定为视网膜神经节细胞样细胞,Thy1.1阳性.4.3体外模拟眼内环境进行室管膜下区神经干细胞诱导为进一步的眼内移植研究提供依据.4.4室管膜下区神经干细胞体外培养及诱导分化的成功,为青光眼等以视网膜神经节细胞为主要损害细胞的视神经视网膜病变的研究和治疗提供了新的思路,为视神经损伤行替代治疗提供充足的材料.三、室管膜下区神经干细胞与视网膜神经细胞共生培养相互影响的实验研究研究目的.观察视网膜神经细胞对室管膜下区神经干细胞成活的影响作用.结论:4.1室管膜下区神经干细胞可提供视网膜神经细胞生长的胶质微环境,促进视网膜神经细胞的存活和突起生长.4.2视网膜神经细胞所分泌的神经营养因子对室管膜下区神经干细胞的生长具有促进作用,可促进室管膜下区神经干细胞突起的生长.四、脑神经生长素和维生素B1、B12及压力对体外培养的视网膜神经细胞的影响.研究目的: 观察脑神经生长素和维生素B1、B12及压力对体外培养的视网膜神经细胞成活和突起的影响.结论:4.1在无神经生长因子条件下成功地建立了视网膜神经细胞体外培养体系,为青光眼等视神经变性疾病及视网膜疾病的研究提供最直接的实验手段,为体外研究青光眼的损害机制、探讨青光眼的预防和治疗方法提供新思路.4.2维生素B1能明显延长体外培养的视网膜神经节细胞的存活时间,维生素B12对体外培养的视网膜神经节细胞的存活及其突起的生长有促进作用.4.3脑神经生长素既能延长体外培养的视网膜神经节细胞的存活,其存活时间为25±3d,与正常对照组16±3d之间差异有显著性(P<0.001),又能促进其突起的生长.4.4自行设计的体外加压模型具有操作简单、占据空间小、可随时改变压力并随时了解培养瓶内压力的特点.可作为模拟青光眼单一压力因素对视网膜神经细胞影响的理想体外模型.高的压力可影响视网膜神经细胞的生长速度和轴突生长的长度.